時間分辨熒光免疫技術(shù)培訓(xùn)

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1、時間分辨熒光技術(shù)廣州市源起生物科技有限公司培　　　訓(xùn)主要內(nèi)容時間分辨熒光免疫技術(shù)（TRF）定義。TRF的標(biāo)記物及特點。為什么叫“時間分辨”?TRF在免疫分析方法學(xué)中的地位。各種免疫方法學(xué)的比較。臨床應(yīng)用回顧標(biāo)記免疫學(xué)發(fā)展放射免疫（精度：10-12mol/L）酶聯(lián)免疫（精度：10-9mol/L）膠體金標(biāo)記（金標(biāo)：10-15mol/L）化學(xué)發(fā)光（精度：10-15mol/L）電化學(xué)發(fā)光（精度：10-17mol/L）時間分辨熒光（精度：10-18mol/L）生物芯片時間分辨熒光技術(shù)（Time-ResolvedFluorescence）時間分辨熒光免疫分析（TRFIA）時間分辨免疫熒光分析（TRIF

2、MA）時間分辨熒光核酸探針分析時間分辨熒光細胞活性分析時間分辨熒光探針分析時間分辨熒光技術(shù)原理（TRF）用三價稀土離子及其螯合物作為示蹤物，代替熒光物質(zhì)、同位素、酶和化學(xué)發(fā)光物質(zhì)，標(biāo)記抗原、抗體、激素、核酸探針等物質(zhì)；當(dāng)免疫反應(yīng)發(fā)生后，根據(jù)稀土離子螯合物的熒光光譜的特點（特異性強、熒光光譜的Stokes位移、壽命長），用時間分辨熒光分析儀，測定免疫反應(yīng)最后產(chǎn)物的熒光強度。根據(jù)熒光強度和相對熒光強度比值，判斷反應(yīng)體系中分析物的濃度，達到定量分析的目的。時間分辨熒光免疫原理圖（Time-resolvedFluorescenceImmunoassay）時間分辨熒光免疫試劑工作原理示意圖微量反應(yīng)

3、孔包被好的表面抗體表面抗原V標(biāo)記物輕鏈螯合劑Eu重鏈VV標(biāo)記物為具有獨特?zé)晒馓匦缘南⊥两饘?--鑭系元素鑭系元素共有15種，應(yīng)用在時間分辨熒光免疫技術(shù)中有四種：銪(Eu)、釤（Sm)、鏑(Dy)、锝(Te)鑭系元素?zé)晒馓攸c：熒光壽命極長鑭系元素螯合物（60~900us)<銪：714us>普通熒光免疫中熒光團：1~100us樣本中蛋白質(zhì)熒光：1~10us，易猝滅。Stokes位移大（大約290nm）銪：發(fā)射光613nm、激發(fā)光340nm，熒光素的Stokes位移為28nm熒光特異性強。（發(fā)射光譜帶很窄：615±5nm）解離-增強技術(shù)可使其熒光性提高100萬倍利用鑭系元素?zé)晒馕锢硖匦?，熒光激發(fā)

4、后在固定時間段檢測特異性熒光而在此時間之前，非特異性熒光已完全衰減為0時間分辨熒光免疫原理圖利用鑭系元素光譜特點，將發(fā)射熒光與激發(fā)熒光分辨開來，零本底的又一保障發(fā)射光譜與激發(fā)光譜間存在的巨大Stokes位移?？梢酝ㄟ^干涉濾光片將發(fā)射光譜與激發(fā)光譜完全分離。DELFIA技術(shù)為臨床檢測帶來的先進性技術(shù)特點檢驗先進性時間分辨光譜分辨特異性熒光與非特異性熒光分離發(fā)射熒光與激發(fā)熒光分離零背景、高特異性解離-增強熒光性大大提高穩(wěn)定的熒光螯合物線性范圍更寬重復(fù)性更好原子標(biāo)記標(biāo)記位點多，可達20個對標(biāo)記物結(jié)構(gòu)及活性影響小無衰變受環(huán)境影響小高穩(wěn)定性，高精確度試劑保質(zhì)期至少一年標(biāo)準(zhǔn)曲線保留時間長同一批次只需兩

5、點定標(biāo)多標(biāo)記單，雙，三，四標(biāo)記同一試劑盒可同時測多個項目靈敏度更高，檢測范圍更廣以下數(shù)據(jù)均出自于各制造廠家自己的產(chǎn)品說明書試劑DELFIAImmuliteACS-180AFP0.1-1000IU/ml0.2-300IU/ml1.0-1000IU/mlCEA0.1-500ng/ml0.2-500ng/ml0.5-100ng/mlHCG0.5-10000U/L5-5000U/L2-1000U/LTSH0.005-100μU/ml0.002-75μU/ml0.03-150μU/mlFSH0.05-256mU/ml0.1-170mU/ml0.3-200mU/mlProg0.08-120nmol/L

6、無0.1-40ng/mlProlactin0.04-250ng/ml0.5-150ng/ml0.3-200ng/ml時間分辨熒光免疫檢測的標(biāo)準(zhǔn)曲線相當(dāng)穩(wěn)定，同一批次的試劑盒可用兩點法加批次的參考曲線定標(biāo)0.5125102050100200500U/L51002000Cps.103DELFIAhFSHN=6標(biāo)準(zhǔn)曲線穩(wěn)定，試劑保質(zhì)期時間長放射性免疫分析法（RIA）應(yīng)用放免自60年代問世以來對臨床診斷起了革命性的貢獻，是一項較為成熟的診斷技術(shù)。夾心法、競爭法的標(biāo)記原理為以后的檢測技術(shù)的發(fā)展奠定了基礎(chǔ)。缺點放射性（125I），對環(huán)境的污染及對身體的危害，該方法已經(jīng)為重視環(huán)保的國家逐步取消。（如整個

7、歐洲僅尚存幾個放免試驗室）125I的半衰期短而導(dǎo)致其試劑有效期短。標(biāo)記物125I的穩(wěn)定性差，導(dǎo)致試劑盒批間、批內(nèi)的變異較大；標(biāo)準(zhǔn)曲線有效期短，必須每次定標(biāo)，造成浪費。操作繁瑣，出報告時間長。無法保存?zhèn)溆?。酶免疫分析法（ELISA）應(yīng)用酶免的最大優(yōu)勢在于避免了對環(huán)境和人體危害。試劑有效期較長。衍生技術(shù)：熒光酶免疫分析增強化學(xué)發(fā)光酶免疫技術(shù)曾經(jīng)一度被認為是取代放免的檢測手段。缺點靈敏度、重復(fù)性不及放免，易造成漏檢和假陽性。因