牛奶中酪蛋白和乳糖的分離

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1、牛奶中酪蛋白和乳糖的分離一、原理牛奶是一種乳狀液,主要由水、脂肪、蛋白質(zhì)、乳糖等組成。牛奶蛋白分為四種：β-乳球蛋白、γ-乳清蛋白、乳清蛋白和酪蛋白。其中酪蛋白對(duì)牛奶蛋白的貢獻(xiàn)最大，占了80%，含有１０％的磷，對(duì)促進(jìn)大腦發(fā)育起至關(guān)重要的作用；乳清蛋白分子比較小，相對(duì)酪蛋白更加易消化；而乳球蛋白多是牛奶中的生物活性物質(zhì)，如免疫球蛋白、乳鐵蛋白、溶菌酶?等。酪蛋白是牛奶中的主要蛋白質(zhì),是含磷蛋白質(zhì)的復(fù)雜混合物。蛋白質(zhì)是兩性化合物,當(dāng)調(diào)節(jié)牛奶的pH達(dá)到酪蛋白的等電點(diǎn)(pH=4.8)時(shí),蛋白質(zhì)所帶正、負(fù)電荷相等,呈電中性,此時(shí)酪蛋白的溶解度最小,會(huì)從牛奶中沉淀出來,以此分離酪

2、蛋白。因酪蛋白不溶于乙醇和乙醚,可用此兩種溶劑除去酪蛋白中的脂肪。　乳糖是一種二糖,由一分子β-D-半乳糖的半縮醛羥基與另一分子葡萄糖C4上的醇性羥基縮去一分子水通過β-1，4糖苷鍵結(jié)合而成。乳糖也不溶于乙醇,當(dāng)乙醇混入乳糖水溶液中,乳糖會(huì)結(jié)晶出來,從而達(dá)到分離的目的。二、實(shí)驗(yàn)材料和試劑???脫脂乳或脫脂奶粉。???醋酸-醋酸鈉緩沖溶液（PH=4.7），95%乙醇，乙醚，碳酸鈣粉末，苯肼試劑。三、實(shí)驗(yàn)步驟???1.從牛奶中分離酪蛋白???　在燒杯中加入2g脫脂奶粉，再加入40ml40℃，PH=4.7的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液40ml，用PH精密試紙檢驗(yàn)液體的PH值（使牛奶

3、pH=4.8），放置冷卻、澄清后,用尼龍布過濾酪蛋白。(在濾液中加入少量粉狀碳酸鈣,留作乳糖的分離。)依次用乙醇、乙醇和乙醚的等體積混合液、乙醚洗滌酪蛋白,去除脂肪,待酪蛋白充分干燥后稱量其重量,并計(jì)算牛奶中酪蛋白的含量。2.從牛奶中分離乳糖???在除去酪蛋白的乳清中，加入1.5gCaCO3粉末，攪拌均勻后加熱至沸。加CaCO3的目的一方面是中和溶液的酸性，防止加熱時(shí)乳糖水解，另方面又能使乳白蛋白沉淀。過濾除去沉淀，在濾液中加入1～2粒沸石，加熱濃縮至3～5ml，加入10ml95%乙醇（注意離開火焰）和少量活性炭，攪拌均勻后在水浴上加熱至沸騰，趁熱過濾，濾液必須澄清。

4、加塞放置過夜，乳糖結(jié)晶析出，抽濾，用95%乙醇洗滌產(chǎn)品。???3.乳糖成脎試驗(yàn)???取自制乳糖溶于少量水中，濃度約為5%，在試管中加入1ml乳糖溶液，1ml苯肼試劑①，搖勻，試管口用棉花塞住，在沸水浴中加熱，并不時(shí)振搖，加熱10～15分鐘后，取出放置冷卻，乳糖脎成結(jié)晶析出。取少量乳糖脎在顯微鏡下觀察其結(jié)晶形態(tài)，可證實(shí)為乳糖。①苯阱試劑有毒，小心使用，勿觸及皮膚，如觸及皮膚先用稀醋酸洗，再用水洗。四、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)　　①酪蛋白等電點(diǎn)隨溫度不同而變化,等電點(diǎn)pH為4.6～4.8。分離酪蛋白時(shí),邊加醋酸,邊攪拌,邊測(cè)pH,同時(shí)觀察沉淀。開始快攪拌,接近等電點(diǎn)時(shí),應(yīng)慢攪拌?！　?/p>

5、②酪蛋白沉淀用200目的尼龍布過濾比較好,同時(shí)進(jìn)行抽濾。用濾紙很難過濾;而用紗布過濾,酪蛋白容易粘在其上?！　、塾靡掖己鸵颐亚逑蠢业鞍壮恋頃r(shí),應(yīng)將酪蛋白搗碎,并在溶劑中攪拌、浸泡,充分洗凈脂肪。純凈的酪蛋白應(yīng)為白色,若發(fā)黃表明脂肪未洗干凈。