實驗二 牛奶中酪蛋白和乳糖的分離.doc

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1、實驗二　牛奶中酪蛋白和乳糖的分離1、實驗目的（1）熟悉蛋白質(zhì)通過等電點沉淀進行分離的原理。（2）熟悉蛋白質(zhì)和乳糖分離純化的操作。2、實驗原理牛奶是營養(yǎng)最完備的食品之一，牛奶的主要成分是水、蛋白質(zhì)、脂肪、糖和礦物質(zhì)。牛奶中蛋白質(zhì)主要是酪蛋白，其濃度大概為35g/L，約占牛奶含量的3.4%，實際上酪蛋白是含磷蛋白的復雜混合物，在牛奶中以其鈣鹽形式存在，即酪蛋白鈣。利用蛋白質(zhì)在等電點時溶解度最小的特性，把牛奶的pH值調(diào)到酪蛋白的等電點（pH=4.8）來沉淀分離酪蛋白，酪蛋白不溶于乙醇，所以用乙醇將其中的脂肪洗滌除去。牛奶中的糖主要是乳糖，也是唯一由哺乳動物合成的糖，乳糖

2、是成長中嬰兒建立其發(fā)育中的腦和神經(jīng)組織所需的物質(zhì)。乳糖不溶于乙醇，在乙醇水溶液中會結(jié)晶出來，從而達到分離的目的。3、實驗儀器與試劑燒杯（250mL×2）、水浴鍋、電爐、真空泵、布氏漏斗、錐形瓶（250mL）、培養(yǎng)皿、量筒、精密pH試紙、白紗布、玻璃棒、濾紙、碳酸鈣、95%乙醇、新鮮牛奶。（1）10%乙酸溶液。（2）25%乙醇溶液。4、實驗操作　?。?）酪蛋白的分離取50mL新鮮牛奶置于250mL燒杯中，在水浴鍋中加熱至40℃，在攪拌下慢慢加入10%乙酸溶液，使混合物溶液的pH值為4.8，用四層紗布覆蓋在另一燒杯口，過濾，再用少量水洗滌沉淀2-3次（在濾液中立即加入

3、5g碳酸鈣，并攪拌幾分鐘，留作下一步實驗用）。把沉淀轉(zhuǎn)移至燒杯中，加入30mL95%的乙醇，攪拌后用布氏漏斗過濾，再用95%乙醇30mL洗滌酪蛋白沉淀2次，每次用攪拌棒攪拌在乙醇中的酪蛋白約10min，并搗碎任何團塊。用布氏漏斗過濾后把固體轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿上，讓乙醇揮發(fā)掉，稱重得酪蛋白。（2）乳糖的分離把上個實驗中的濾液在電爐上加熱，使其平衡沸騰約10min，將熱的混合物用布氏漏斗過濾，除去沉淀的蛋白質(zhì)和殘余的碳酸鈣。把濾液轉(zhuǎn)移至燒杯中并將濾液濃縮至約30mL，在熱的溶液中加入95%乙醇45mL，并繼續(xù)加熱，待其混合均勻后，趁熱過濾，濾液應澄清，把濾液移至錐形瓶中，加

4、塞，放置1-2天，讓乳糖充分結(jié)晶，減壓過濾，分離出乳糖晶體，并用冷的95%乙醇水溶液洗滌產(chǎn)物，待其干燥后穩(wěn)重。5、數(shù)據(jù)處理　　記錄分離得到的酪蛋白和乳糖的質(zhì)量，計算收得率。1