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1、實驗報告一、實驗名稱：從牛奶中分離酪蛋白二、實驗?zāi)康模?.學(xué)習(xí)從膠體中提取某一類物質(zhì)的方法。2.學(xué)習(xí)蛋白質(zhì)的各種顏色反應(yīng)及其原理。三、實驗原理：1.蛋白質(zhì)是兩性化合物，溶液的酸堿性直接影響蛋白質(zhì)分子所帶的電荷。當調(diào)節(jié)牛奶的pH值達到酪蛋白的等電點（pl）4.8左右時，蛋白質(zhì)所帶正、負電荷相等，呈電中性，此時酪蛋白的溶解度最小，會以沉淀形式從牛奶中析出。2.縮二脲反應(yīng)原理：具有兩個或兩個以上肽鍵的化合物在堿性條件下與Cu2+反應(yīng),生成紅紫色的絡(luò)合物。所有的蛋白質(zhì)均有此顯色反應(yīng)。3.蛋白黃色反應(yīng)原理：硝酸將蛋白質(zhì)分子中的苯環(huán)硝化，
2、在加熱狀態(tài)下產(chǎn)生了黃色硝基苯衍生物，再加堿顏色加深呈橙黃色。這是含有芳香族氨基酸特別是含有酪氨酸和色氨酸的蛋白質(zhì)所特有的顏色反應(yīng)。4.茚三酮反應(yīng)原理：蛋白質(zhì)與茚三酮共熱，產(chǎn)生藍紫色的還原茚三酮、茚三酮和氨的縮合物。此反應(yīng)為一切氨基酸及α-氨基酸所共有。四、實驗步驟及現(xiàn)象：1.取50mL脫脂牛奶于150mL燒杯中，用熱水浴加熱至40℃，維持此溫度，邊攪拌邊加稀醋酸（1：9）溶液約2mL——有白色沉淀析出。2.繼續(xù)攪拌并使懸濁液冷卻至室溫，然后將混合物轉(zhuǎn)入離心杯中，于3000r/min離心15min。3.離心完畢后，上清液倒入乳糖
3、回收瓶中，沉淀用95%的乙醇（20ml）攪勻，然后用布氏漏斗減壓過濾，用乙醇-乙醚（1：1）混合液洗滌沉淀2次，每次約10ml，最后用5ml乙醚洗滌沉淀一次，減壓過濾至干——得到干燥的白色固體。4.將干粉鋪于表面皿上，稱量并計算牛奶中酪蛋白含量。5.稱取0.5g酪蛋白，溶解于0.4M氫氧化鈉溶液的生理鹽水（5mL）中，然后滴加3-4滴1%硫酸銅溶液，振蕩試管——溶液變成紫色。五、實驗數(shù)據(jù)：空表面皿的質(zhì)量m0=28.15g表面皿與酪蛋白的總質(zhì)量m1=31.78g牛奶中酪蛋白的質(zhì)量m=m1-m0=3.63g六、討論與感想：1.牛奶
4、是一種膠體，在正常情況下是均一穩(wěn)定的，要想分離出其中的某一成分，就應(yīng)該想辦法使這種成分變成沉淀析出。通過本次實驗，我知道了可以通過調(diào)節(jié)膠體的酸堿性，來改變蛋白質(zhì)分子所帶電荷，使其達到等電點。此時蛋白質(zhì)分子間的電荷作用力最小，分子間沒有了間隙，浮力減小，蛋白質(zhì)就會沉淀。而實驗中50ml牛奶和2ml稀醋酸（1：9）所配成的混合液的pH恰好在4.8左右，正好是蛋白質(zhì)的2等電點，從而可以使最多的酪蛋白沉淀析出。1.加入的醋酸不能過量，過量酸會促使牛奶中的乳糖水解為半乳糖和葡萄糖，難以將酪蛋白分離。2.析出的酪蛋白沉淀是絮狀物，直接過濾
5、會堵塞漏斗孔，所以要先對懸濁液進行離心操作，使得絮狀物富集，便于過濾。3.用乙醇-乙醚混合液洗滌沉淀的原因是因為酪蛋白不溶于乙醇和乙醚，而脂質(zhì)溶于其中，可以用來洗滌除去酪蛋白粗制品中的脂質(zhì)。4.理論上最終得到的酪蛋白應(yīng)該是純白色的，但是實際得到的酪蛋白表面會有一些黃色物質(zhì)，這些黃色物質(zhì)是沒有洗凈的殘留脂質(zhì)。其原因可能是在用乙醇-乙醚混合液洗滌沉淀的時候，沒有充分攪拌，使得洗滌不徹底。5.通過查找資料得知，蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)是不同物質(zhì)與蛋白質(zhì)中的特定結(jié)構(gòu)（例如肽鍵、苯環(huán)、氨基酸等）的反應(yīng)，因為反應(yīng)能產(chǎn)生特定的顏色，所以可以用來鑒定
6、蛋白質(zhì)。但是也要注意，顏色反應(yīng)不是蛋白質(zhì)的專一反應(yīng)，一些非蛋白物質(zhì)也可產(chǎn)生相同顏色反應(yīng)，因此不能僅根據(jù)顏色反應(yīng)的結(jié)果決定被測物是否是蛋白質(zhì)。顏色反應(yīng)是一些常用的蛋白質(zhì)定性和定量測定的依據(jù)。6.離心儀是本次實驗中第一次接觸到的器械，它的使用也有注意事項：處于相對位置的兩個離心杯要保證質(zhì)量相同，因為高速轉(zhuǎn)動需要很大的向心力，如果相對位置的兩個離心杯質(zhì)量不同，會使得轉(zhuǎn)軸受力不均勻，可能導(dǎo)致轉(zhuǎn)軸彎曲。所以，在放入離心機之前，要用天平比較兩個離心杯和其中液體的質(zhì)量，并進行適當調(diào)整。2
