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《大鼠胚胎神經(jīng)干細胞的分離、培養(yǎng)和鑒定》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、大鼠胚胎神經(jīng)干細胞的分離、培養(yǎng)和鑒定【關(guān)鍵詞】胚胎【摘要】目的：探討胚胎神經(jīng)干細胞的分離、培養(yǎng)和鑒定方法。方法：原代培養(yǎng)、培養(yǎng)細胞生長狀況觀察、組織化學(xué)鑒定、流式細胞儀進行細胞凋亡分析。結(jié)果：準確分離出了神經(jīng)干細胞，了解其生長規(guī)律及細胞凋亡的情況。結(jié)論：用此方法分離胚胎神經(jīng)干細胞實用、便捷和可行。【關(guān)鍵詞】大鼠;胚胎;神經(jīng)干細胞Extraction、CultureandAppraisaloftheRatEmbryoNeuralStemCellsJIShengpu,WEIHuipingHebeiNorthUniver
2、sity，Zhangjiakou，075000，China【ABSTRACT】Objective:Tomasterextraction、cultureandappraisaloftheratembryoneuralstemcellsinitiallybyexperiment,Inthispaperthegrowthruleandapoptosisofembryoneuralstemcellswerestudied.Methods:thegrowthcycleandgrowthstateforprimarycultu
3、reneuralstemcellswereobservedcarefully,andapoptosiswasanalyzedwithhistochemistryidentiticationandFCM(flowcytometry)aswell.Results:investigatedthororghlyTheneuralstemcellswereabstractedaccurately,andtheirdevelopmentcycleandapoptosisconditionwereinvestigatedthor
4、oughly.Conclusion:Theresultabovecanprovidereliableevidencetoobtainagreatquantityofneuralstemcells. 【KEYWORDS】rat;embryo;neuralstemcells干細胞具有可再生為各種組織、器官的潛能，將其分離并使之向特定方向分化，就可以用健康組織代替病變組織，治療心肌梗死、糖尿病等組織壞死性疾病、退行性病變、自體免疫性疾病等。神經(jīng)干細胞（neuralstemcells,NSCs）是具有增殖和分化潛能的原始神
5、經(jīng)細胞，它能分化成神經(jīng)組織的各種細胞，如神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞和少突膠質(zhì)細胞等，并能自我更新，甚至能終身存在于神經(jīng)系統(tǒng)之中。NSCs在理論和臨床上都具有巨大的價值，我們知道，腦老化可能是神經(jīng)系統(tǒng)退變性疾病的初級階段，與疾病的發(fā)生有著相同的基礎(chǔ)，目前已用NSCs治療神經(jīng)系統(tǒng)退變性疾病，并且也用于腦老化的治療。為此我們需要大量的神經(jīng)干細胞，本課題選取大鼠胚胎神經(jīng)干細胞，探討其分離、培養(yǎng)、鑒定的方法，并探討其體外生長的生物學(xué)特性。1材料和方法1.1材料培養(yǎng)基：小牛血清，天津生物制品研究所；DMEM/F12培養(yǎng)基；EGF、b
6、FGF、輔助培養(yǎng)基等均購自北京試劑商店。實驗動物：20d大鼠胚胎，由河北北方學(xué)院動物中心提供。1.2方法原代培養(yǎng)取材：在無菌室內(nèi)取孕鼠新鮮子宮，用燒杯盛之，用75%酒精浸泡，嚴格無菌的條件下，取出胚胎，剪開頭皮，撕去腦膜，掀開大腦皮層，分別取側(cè)腦室部位和大腦皮層腦組織，用Hanks液反復(fù)沖洗，去掉血液和血塊，除盡腦膜組織和結(jié)締組織。分離細胞：將組織移入青霉素小瓶，剪碎腦組織，加入025%胰蛋白酶37℃度消化15min，然后加入含10%小牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基終止消化，用200目不銹鋼篩網(wǎng)過篩，獲得單細胞懸液
7、，然后離心，獲細胞沉淀（1000轉(zhuǎn)/min，8min）。細胞培養(yǎng)：在細胞沉淀內(nèi)加入1ml含小牛血清的培養(yǎng)基，吹打均勻，制成細胞懸液。取出一滴細胞懸液，細胞計數(shù)板計數(shù)，然后以35萬/ml細胞接種到25ml培養(yǎng)瓶中，37℃，5%二氧化碳，95%濕度孵箱培養(yǎng)。24h后除去貼壁的分化細胞和沉淀雜質(zhì)。分為兩組：一組加入含10%小牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基；另一組換為新鮮無血清胚胎神經(jīng)干細胞培養(yǎng)基，其組分為：DMEM/F12，20ng/mlEGF,20ng/mlbFGF，輔助培養(yǎng)基。培養(yǎng)后視培養(yǎng)基顏色和細胞生長狀況進行稀釋
8、和換液。培養(yǎng)細胞生長狀況觀察每天對細胞進行計數(shù)，隨即選擇10個高倍視野，取其平均值，作為每天的細胞數(shù)目指標，由此可知細胞的生長狀況。每天對細胞的形態(tài)、分裂、分化情況、有無克隆球等生物學(xué)特征進行觀察，記錄結(jié)果。2005年6月河北北方學(xué)院學(xué)報（醫(yī)學(xué)版）第3期2005年6月吉勝樸等：大鼠胚胎神經(jīng)干細胞的分離、培養(yǎng)和鑒定第3期組織化學(xué)鑒定原代培養(yǎng)次日換液時，取一瓶培
