體外培養(yǎng)人羊膜上皮細(xì)胞的表型及分化能力

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1、www.CRTER.org連建春，等.體外培養(yǎng)人羊膜上皮細(xì)胞的表型及分化能力體外培養(yǎng)人羊膜上皮細(xì)胞的表型及分化能力連建春1，劉洋2，劉暢2,3，呂世杰4，郭昕2，南豐5，孫廣煒2，賀欣1，馬小軍2(1大連醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院，遼寧省大連市116044；2中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所生物醫(yī)用材料工程組，遼寧省大連市116023；3中國科學(xué)院大學(xué)，北京市100049；4大連市婦產(chǎn)醫(yī)院，遼寧省大連市116021；5大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院骨科，遼寧省大連市116023)文章亮點(diǎn)：1實(shí)驗(yàn)分析了體外培養(yǎng)對羊膜上皮細(xì)胞表型以及分化能力的影響，探討原代羊膜上皮細(xì)胞干性標(biāo)志物SSEA-4的表達(dá)水平與

2、體外培養(yǎng)后羊膜上皮細(xì)胞表型以及分化能力變化的關(guān)聯(lián)性。2結(jié)果提示需要建立臨床樣本篩選指標(biāo)以實(shí)現(xiàn)羊膜上皮細(xì)胞的質(zhì)量監(jiān)控；需要繼續(xù)優(yōu)化培養(yǎng)條件以維持體外培養(yǎng)過程中SSEA-4等干性標(biāo)志物的高表達(dá)；羊膜上皮細(xì)胞的向心肌樣細(xì)胞分化的能力受到個體差異與培養(yǎng)條件的影響，還需要進(jìn)一步探討。關(guān)鍵詞：組織構(gòu)建；組織工程；羊膜上皮細(xì)胞；體外培養(yǎng)；SSEA-4；羊膜上皮細(xì)胞標(biāo)志物；心肌樣細(xì)胞分化；國家自然科學(xué)基金主題詞：干細(xì)胞；羊膜；上皮細(xì)胞；細(xì)胞分化；肌細(xì)胞,心臟；抗原,表面基金資助：國家自然科學(xué)基金(31271055)：模擬細(xì)胞微環(huán)境強(qiáng)化干細(xì)胞體外定向預(yù)分化體系的研究及其工程化構(gòu)建；國家自然科學(xué)基金(

3、81101757)：利于腫瘤干細(xì)胞擴(kuò)增的基質(zhì)剛度與乏氧微環(huán)境的構(gòu)建及調(diào)控。國家自然科學(xué)基金(21076207)：細(xì)胞間質(zhì)體外模擬系統(tǒng)的構(gòu)建及物質(zhì)傳遞基本規(guī)律的研究。國家科技重大專項(xiàng)(2012ZX10002-011-013)：肝癌細(xì)胞三維培養(yǎng)模型標(biāo)準(zhǔn)化構(gòu)建和規(guī)模化制備技術(shù)研究；大連市科學(xué)技術(shù)基金(2012J21DW029)：體外腫瘤干細(xì)胞培養(yǎng)體系的建立及應(yīng)用摘要背景：人羊膜上皮細(xì)胞具有多系分化能力，是再生醫(yī)學(xué)中重要的細(xì)胞來源。目前的研究多集中于對其分化能力的考察，而體外培養(yǎng)過程中羊膜上皮細(xì)胞的生物學(xué)特征如何變化尚不清楚。目的：分析體外培養(yǎng)對人羊膜上皮細(xì)胞生長、表型及向心肌樣細(xì)胞分化的

4、能力等生物學(xué)特性的影響，探討原代人羊膜上皮細(xì)胞干性標(biāo)志物SSEA-4的表達(dá)水平與人羊膜上皮細(xì)胞生物學(xué)特性變化之間的關(guān)聯(lián)性。方法：使用統(tǒng)一分離方法獲得原代羊膜上皮細(xì)胞并進(jìn)行體外培養(yǎng)。利用CCK-8、流式細(xì)胞儀及real-timePCR等手段檢測不同培養(yǎng)階段人羊膜上皮細(xì)胞的增殖、表型以及向心肌樣細(xì)胞分化的能力。結(jié)果與結(jié)論：不同胎兒樣本來源的原代人羊膜上皮細(xì)胞的SSEA-4表達(dá)在26.7%-97%，存在很大的個體差異。并且，隨著傳代次數(shù)的增加，人羊膜上皮細(xì)胞的SSEA-4表達(dá)水平顯著降低，其下降程度與原代SSEA-4的表達(dá)水平無關(guān)。另外，培養(yǎng)后人羊膜上皮細(xì)胞的心肌分化潛能也存在很大個體差

5、異，且其差異與原代人羊膜上皮細(xì)胞的SSEA-4表達(dá)水平的高低無關(guān)。結(jié)果提示，不同胎兒樣本來源的原代人羊膜上皮細(xì)胞的SSEA-4表達(dá)水平受到個體差異的影響，需要建立更準(zhǔn)確的臨床樣本篩選指標(biāo)來穩(wěn)定獲得原代高表達(dá)SSEA-4的胎兒樣本，以實(shí)現(xiàn)對人羊膜上皮細(xì)胞的質(zhì)量監(jiān)控。另外，體外培養(yǎng)過程中SSEA-4的表達(dá)水平受到培養(yǎng)條件的影響，需要繼續(xù)優(yōu)化培養(yǎng)條件以維持其高表達(dá)。此外，人羊膜上皮細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞分化的能力受到樣本個體差異以及培養(yǎng)條件的影響，在今后還需要進(jìn)一步研究。連建春，劉洋，劉暢，呂世杰，郭昕，南豐，孫廣煒，賀欣，馬小軍.體外培養(yǎng)人羊膜上皮細(xì)胞的表型及分化能力[J].中國組織工程研究

6、，2014，18(2):211-217.PhenotypeanddifferentiationcapacityofhumanamnioticepithelialcellsculturedinvitroLianJian-chun1,LiuYang2,LiuChang2,3,LvShi-jie4,GuoXin2,NanFeng5,SunGuang-wei2,HeXin1,MaXiao-jun2(1TheLaboratoryMedicalCollege,DalianMedicalUniversity,Dalian116044,LiaoningProvince,China;2Laborat

7、oryofBiomedicalMaterialEngineering,DalianInstituteofChemicalPhysics,ChineseAcademyofSciences,Dalian116023,LiaoningProvince,China;3UniversityofChineseAcademyofSciences,Beijing100049,China;4DalianMaternityHospital,Dalian116021,LiaoningPro