體外培養(yǎng)人羊膜上皮細胞的表型及分化能力

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1、www.CRTER.org連建春，等.體外培養(yǎng)人羊膜上皮細胞的表型及分化能力體外培養(yǎng)人羊膜上皮細胞的表型及分化能力連建春1，劉洋2，劉暢2,3，呂世杰4，郭昕2，南豐5，孫廣煒2，賀欣1，馬小軍2(1大連醫(yī)科大學檢驗醫(yī)學院，遼寧省大連市116044；2中國科學院大連化學物理研究所生物醫(yī)用材料工程組，遼寧省大連市116023；3中國科學院大學，北京市100049；4大連市婦產(chǎn)醫(yī)院，遼寧省大連市116021；5大連醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院骨科，遼寧省大連市116023)文章亮點：1實驗分析了體外培養(yǎng)對羊膜上皮細胞表型

2、以及分化能力的影響，探討原代羊膜上皮細胞干性標志物SSEA-4的表達水平與體外培養(yǎng)后羊膜上皮細胞表型以及分化能力變化的關(guān)聯(lián)性。2結(jié)果提示需要建立臨床樣本篩選指標以實現(xiàn)羊膜上皮細胞的質(zhì)量監(jiān)控；需要繼續(xù)優(yōu)化培養(yǎng)條件以維持體外培養(yǎng)過程中SSEA-4等干性標志物的高表達；羊膜上皮細胞的向心肌樣細胞分化的能力受到個體差異與培養(yǎng)條件的影響，還需要進一步探討。關(guān)鍵詞：組織構(gòu)建；組織工程；羊膜上皮細胞；體外培養(yǎng)；SSEA-4；羊膜上皮細胞標志物；心肌樣細胞分化；國家自然科學基金主題詞：干細胞；羊膜；上皮細胞；細胞分化；肌細胞

3、,心臟；抗原,表面基金資助：國家自然科學基金(31271055)：模擬細胞微環(huán)境強化干細胞體外定向預分化體系的研究及其工程化構(gòu)建；國家自然科學基金(81101757)：利于腫瘤干細胞擴增的基質(zhì)剛度與乏氧微環(huán)境的構(gòu)建及調(diào)控。國家自然科學基金(21076207)：細胞間質(zhì)體外模擬系統(tǒng)的構(gòu)建及物質(zhì)傳遞基本規(guī)律的研究。國家科技重大專項(2012ZX10002-011-013)：肝癌細胞三維培養(yǎng)模型標準化構(gòu)建和規(guī)?；苽浼夹g(shù)研究；大連市科學技術(shù)基金(2012J21DW029)：體外腫瘤干細胞培養(yǎng)體系的建立及應(yīng)用摘要背景

4、：人羊膜上皮細胞具有多系分化能力，是再生醫(yī)學中重要的細胞來源。目前的研究多集中于對其分化能力的考察，而體外培養(yǎng)過程中羊膜上皮細胞的生物學特征如何變化尚不清楚。目的：分析體外培養(yǎng)對人羊膜上皮細胞生長、表型及向心肌樣細胞分化的能力等生物學特性的影響，探討原代人羊膜上皮細胞干性標志物SSEA-4的表達水平與人羊膜上皮細胞生物學特性變化之間的關(guān)聯(lián)性。方法：使用統(tǒng)一分離方法獲得原代羊膜上皮細胞并進行體外培養(yǎng)。利用CCK-8、流式細胞儀及real-timePCR等手段檢測不同培養(yǎng)階段人羊膜上皮細胞的增殖、表型以及向心肌樣

5、細胞分化的能力。結(jié)果與結(jié)論：不同胎兒樣本來源的原代人羊膜上皮細胞的SSEA-4表達在26.7%-97%，存在很大的個體差異。并且，隨著傳代次數(shù)的增加，人羊膜上皮細胞的SSEA-4表達水平顯著降低，其下降程度與原代SSEA-4的表達水平無關(guān)。另外，培養(yǎng)后人羊膜上皮細胞的心肌分化潛能也存在很大個體差異，且其差異與原代人羊膜上皮細胞的SSEA-4表達水平的高低無關(guān)。結(jié)果提示，不同胎兒樣本來源的原代人羊膜上皮細胞的SSEA-4表達水平受到個體差異的影響，需要建立更準確的臨床樣本篩選指標來穩(wěn)定獲得原代高表達SSEA-4

6、的胎兒樣本，以實現(xiàn)對人羊膜上皮細胞的質(zhì)量監(jiān)控。另外，體外培養(yǎng)過程中SSEA-4的表達水平受到培養(yǎng)條件的影響，需要繼續(xù)優(yōu)化培養(yǎng)條件以維持其高表達。此外，人羊膜上皮細胞向心肌樣細胞分化的能力受到樣本個體差異以及培養(yǎng)條件的影響，在今后還需要進一步研究。連建春，劉洋，劉暢，呂世杰，郭昕，南豐，孫廣煒，賀欣，馬小軍.體外培養(yǎng)人羊膜上皮細胞的表型及分化能力[J].中國組織工程研究，2014，18(2):211-217.Phenotypeanddifferentiationcapacityofhumanamnioticep

7、ithelialcellsculturedinvitroLianJian-chun1,LiuYang2,LiuChang2,3,LvShi-jie4,GuoXin2,NanFeng5,SunGuang-wei2,HeXin1,MaXiao-jun2(1TheLaboratoryMedicalCollege,DalianMedicalUniversity,Dalian116044,LiaoningProvince,China;2LaboratoryofBiomedicalMaterialEngineering,

8、DalianInstituteofChemicalPhysics,ChineseAcademyofSciences,Dalian116023,LiaoningProvince,China;3UniversityofChineseAcademyofSciences,Beijing100049,China;4DalianMaternityHospital,Dalian116021,LiaoningPro