纖維素cmc酶、fpa酶和半纖維素酶測定

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1、纖維素CMC酶、FPA酶和半纖維素酶測定1.纖維素CMC酶1.0標(biāo)題用3.5一二硝基水楊酸法測定纖維素CMC酶活性單位。2.0范圍生產(chǎn)分析和質(zhì)量控制部門適用。3.0原理纖維素CMC酶（EC3.2.1.4）水解羧基纖維素分子中β－1.4葡萄糖苷鍵,釋放出的還原糖(以葡萄糖計)與3.5二硝基水楊酸(DNS)反應(yīng),產(chǎn)生顏色變化,這種顏色變化與釋放還原糖(以葡萄糖計)的量成正比關(guān)系,即與酶樣品中的酶活性成正比。通過在550nm的光吸收值查對標(biāo)準(zhǔn)曲線(以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)物)可以確定還原糖產(chǎn)生的量,從而確定出酶的活力單位。4.0試劑4.1無水醋酸鈉(分析純)4.

2、2冰醋酸(分析純)4.33.5－二硝基水楊酸4.4無水葡萄糖4.5四水酒石酸鉀鈉(分析純)4.6氫氧化鈉(分析純)4.7重蒸苯酚(分析純)4.8無水亞硫酸鈉(分析純)4.9疊氮化鈉(分析純)4.10羧甲基纖維素鈉5.0儀器5.1水浴鍋(恒溫)50±1℃5.2電熱干燥箱80±1℃5.3722型分光光度機(jī)計5.4分析天平感量0.1㎎5.5一級玻璃制品5.6電冰箱6．0試劑的準(zhǔn)備6．1乙酸－乙酸鈉緩沖溶液（PH=4.8）溶液A：量取冰醋酸6ml，定容至1000ml，制成0.1M醋酸鈉溶液。溶液B：稱取8.2g醋酸鈉，溶解后容至1000ml，制成0.1M

3、醋酸鈉溶液。以A：B=4：6的比例混合，低溫冷藏備用。6.2DNS試劑:溶液A:稱分析純NaOH104g溶于1300ml水中,加入30g分析純3.5一二硝基水楊酸。溶液B:稱分析純酒石酸鉀鈉910g，溶于2500ml熱水中，再稱取25g重蒸苯酚和25g無水亞硫酸鈉加入酒石酸鉀鈉溶液。將A、B溶液混合，定容至5000ml，貯存于棕色瓶中，暗處放置一星期后可使用。6.3CMC溶液：用羧甲基纖維素鈉（CMC）以PH4.8醋酸緩沖液配成1%的溶液。7．0標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：7.1無水葡萄糖80℃烘干至恒重。7.2準(zhǔn)確稱取1.000g溶于1000ml水中，加10

4、mg疊氮化鈉防腐，4℃冷藏備用。7.3標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖曲線制作取1mg/ml標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液各0，0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2ml補(bǔ)加水至2.0ml,加入2.0mlDNS試劑,具塞,沸水浴中加熱10分鐘,冷卻后定容至15ml,分光光度計550nm波長下測OD值,3次重復(fù)實驗的均值用最小乘法相擬合Y=ax+b一元線性方程。由光密度值引得葡萄糖量。8.0CMC酶活性測定。8.1活性定義：1g酶粉（1ml酶液）于50℃PH4.8條件下，每分鐘水解1%CMC溶液產(chǎn)生1μg還原糖（以葡萄糖計）的酶量定義為1個CMC酶活力單位。8.2分析程序：取三支

5、15ml刻度試管分別加入0.2ml稀釋酶液，在分別吸取1.8mlCMC溶液,50℃水浴保溫30分鐘,空白樣用0.2ml稀釋酶液,加入1.8ml醋酸緩沖液,同樣50℃水浴30分鐘,再吸取DNS2ml搖勻后,具塞,沸水浴反應(yīng)10分鐘,冷卻后,補(bǔ)加水至15ml,輕輕上下?lián)u勻,用空白調(diào)零點,于550nm下測OD值。9.0計算活力單位A×D×5×1000CMC酶活力=————————μ/g(ml)30A：OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上對應(yīng)的葡萄糖量（）D：酶粉（液）稀釋倍數(shù)2.FPA酶即濾紙酶，即以濾紙作為底物，因濾紙中的纖維素含量較高，F(xiàn)PA酶水解濾紙中的纖維素，釋

6、放出的還原糖與3.5-乙硝基水揚(yáng)酸（DNS）反應(yīng)，產(chǎn)生顏色變化，這種顏色變化與釋放的還原糖量成正比關(guān)系，即與酶樣品的酶活性成正比關(guān)系。通過在550NM的光吸收值查對標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以確定還原糖產(chǎn)生的量，從而確定酶活力單位，它也是恒量纖維素酶活的一個重要指標(biāo)。3.半纖維素酶：1.0標(biāo)題用3.5一二硝基水楊酸測定半纖維素酶活性單位2.0范圍生產(chǎn)分析和質(zhì)量控制部門適用3.0原理半纖維素酶水解木聚糖，釋放出的還原糖（以木糖計）與3.5一二硝基水楊酸（DNS）反應(yīng)，產(chǎn)生顏色變化，這種顏色變化與釋放的還原性糖（以木糖計）的量成正比關(guān)系，即與酶樣品中的酶活性成正比

7、。通過在550nm的光吸收值查對標(biāo)準(zhǔn)曲線（以木糖為標(biāo)準(zhǔn)物）可以確定還原糖產(chǎn)生的量，從而確定出酶的活力單位。4.0單位定義一個半纖維素酶單位定義為；1g酶粉（或1ml酶液）于50℃PH4.8條件下，每分鐘分解1%木聚糖溶液產(chǎn)生一微克還原糖（以木糖）的酶量定義為一個半纖維素酶活力單位。5.0試劑5.1無水醋酸鈉（分析純）5.2冰醋酸（分析純）5.33.5一二硝基水楊酸（分析純）5.4木糖（分析純）5.5四水酒石酸鉀鈉（分析純）5.6氫氧化鈉（分析純）5.7重蒸苯酚（分析純）5.8無水亞硫酸鈉（分析純）5.9疊氮化鈉（分析純）5.10木聚糖（分析純）6

8、.0儀器6.1水浴鍋（恒溫）50±1℃6.2電熱干燥箱80±1℃6.3772型分光光度計6.4分析天平感量0.16.5一級玻璃制品6.6