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1、耐亞胺培南鮑曼不動(dòng)桿菌碳青霉烯酶檢測(cè)及同源性分析·154·◇臨床醫(yī)學(xué)研究◇安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2012Feb；47（2）1，21芮曉艷，胡杰貴3摘要目的了解臨床分離亞胺培南耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌采用Mi-（IRAB）碳青霉烯酶的基因型及同源性。方法重復(fù)計(jì)入。1．2試劑與主要儀器croScanWalkAway-40微生物分析儀進(jìn)行菌株鑒定和藥敏試23、OXA-24、OXA-51、驗(yàn)，聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測(cè)OXA-OXA-58組碳青霉烯酶基因型，腸桿菌科重復(fù)序列PCR（ERIC-P
2、CR）檢測(cè)耐藥基因陽(yáng)性菌株的同源性。結(jié)果64株IRAB均為多重耐藥菌株，其中10株（15.6%）為泛耐藥51株（79.7%）blaOXA-23陽(yáng)性，4株（6.3%）blaOXA-58陽(yáng)菌株，57株（89.1%）blaOXA-66/blaOXA-51組陽(yáng)性。ERIC-PCR結(jié)果性，顯示blaOXA-23陽(yáng)性菌株中47株為同一基因譜。結(jié)論菌株間可———————————————————————————————————————————————能存在克隆傳播。的重要機(jī)制，關(guān)鍵詞鮑曼不動(dòng)桿菌；碳青霉烯酶；同源性R378.99；R978.11中圖分類
3、號(hào)產(chǎn)OXA-23型碳青霉烯酶是我院鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)亞胺培南耐藥頭孢哌酮/舒巴坦和米諾環(huán)10×PCR素藥敏紙片購(gòu)自英國(guó)Oxiod公司；Taq酶、dNTPMixture購(gòu)自大連寶生物公司；PCR引Buffer、物由上海生工生物工程有限公司合成；DNA擴(kuò)增儀購(gòu)自德國(guó)Biometra公司；凝膠成像系統(tǒng)購(gòu)自上海天能公司。1．3菌株鑒定和藥敏試驗(yàn)采用MiroScanWalk-Away-40全自動(dòng)微生物分析儀及其配套的NegativeComboPanelTgpe31（革蘭氏陰性復(fù)合板31）進(jìn)行細(xì)頭孢哌酮/舒巴坦和米諾環(huán)素藥菌鑒定及藥敏試驗(yàn)，敏試驗(yàn)為紙片
4、擴(kuò)散法。質(zhì)控菌株為銅綠假單胞菌ATCC27853，大腸埃希菌ATCC25922，藥敏試驗(yàn)判斷標(biāo)準(zhǔn)CLSI2008。1．4碳青霉烯酶基因檢測(cè)及測(cè)序采用煮沸法提取細(xì)菌總DNA。PCR反應(yīng)體系均為50μl，包括510×PCRBuffer5μl，Taq酶（5U/μl）0.25μl模板，文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)1000－1492（2012）02－0154－04———————————————————————————————————————————————Ab）是鮑曼不動(dòng)桿菌（Acinetobacterbaumannii，非發(fā)酵的需氧的革蘭陰性桿菌，廣泛
5、的分布在醫(yī)院是引起醫(yī)院感染的重要的條件致病菌，尤其環(huán)境中，是重癥監(jiān)護(hù)病房，可引起多種院內(nèi)感染，包括敗血癥、肺炎、心內(nèi)膜炎、腦膜炎、傷口的感染或泌尿系統(tǒng)［1］Ab對(duì)多種抗生素天然耐藥，碳青霉烯類的感染，對(duì)不動(dòng)桿菌屬有較好的抗菌活性，是治療不動(dòng)桿菌屬嚴(yán)重感染的首選藥物，近年來(lái)Ab對(duì)碳青霉烯類的耐藥率呈上升趨勢(shì)，給臨床治療帶來(lái)很大的困難。本研究收集臨床分離耐亞胺培南的鮑曼不動(dòng)桿菌（imipenemresistantAcinetobacterbaumannii，IRAB），檢測(cè)碳青霉烯酶基因型及菌株間同源性。11．1材料與方法dNTPMixtu
6、re4μl，μl，上、下游引物（20μmol/L）各1μl，雙蒸水33.75μl，各種靶基因引物序列和反應(yīng)［2－3］。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1.5%的瓊脂糖條件見(jiàn)表1凝膠電泳，溴化乙錠染色，用凝膠成像系統(tǒng)觀察結(jié)果。PCR陽(yáng)性產(chǎn)物委托上海生工生物工程有限公司雙向測(cè)序，測(cè)序結(jié)果在GenBank中比對(duì)。表1引物名稱blaOXA-23-like-F-RblaOXA-24-like-F-RFblaOXA-51-like--R———————————————————————————————————————————————blaOXA-58-like-F-R
7、靶基因PCR引物序列引物序列（5'-3'）GATGTGTCATAGTATTCGTCGTCACAACAACTAAAAGCACTGGGTTAGTTGGCCCCCTTAAAAGTTGAGCGAAAAGGGGATTTAATGCTTTGATCGGCCTTGTGGATTGCACTTCATCTTGGAAGTATTGGGGCTTGTGCTGCCCCTCTGCGCTCTACATAC599523535224652產(chǎn)物長(zhǎng)度（bp）1067退火溫度（℃）52菌株來(lái)源收集安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院2009年1月～2009年12月住院患者送檢的痰液標(biāo)
8、本中分離的64株IRAB，同一患者多次分離標(biāo)本未2011－09－01接收作者單位：安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科、感染科，合肥230022—————————————————————————————————
