耐亞胺培南鮑曼不動桿菌耐藥機制探析

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1、耐亞胺培南鮑曼不動桿菌耐藥機制探析海青山(內(nèi)蒙古呼倫貝市中蒙醫(yī)院檢驗科021000)【中圖分類號】R969【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】1672-5085(2013)06-0421-01【摘要】目的通過對菌株的檢驗來對鮑曼不動桿菌對亞胺培南的耐藥機制進(jìn)行探討。方法在臨床中要先對耐亞胺培南的鮑曼不動桿菌進(jìn)行分離，細(xì)菌鑒定釆用法國梅里埃ATB半自動細(xì)菌鑒定儀，藥敏選用KB紙片法與藥敏上機板條相結(jié)合，三維試驗檢測ESBLs和AmpC酶，PCR檢驗方法檢測耐藥基因，PCR陽性產(chǎn)物進(jìn)行基因測序。結(jié)果通過與基因庫的比對可以發(fā)現(xiàn)，所選的6株鮑曼不動桿菌大多數(shù)是多重耐藥菌株，在三維試驗中，此類菌株

2、均產(chǎn)牛了ESBLs,有4株菌株產(chǎn)牛了AmpC酶。在6株鮑曼不動桿菌的耐藥基因型檢測中發(fā)現(xiàn)有4株AmpC酶陽性，6株均為TEM陽性，4株為PER陽性，4株為0XA-24>VIM、IMP和VEB型等均為陰性，6株OXA-23型均陽性。結(jié)論耐亞胺培南鮑曼不動桿菌有OXA?23型碳青霉烯酶基因，OXA?23型碳青霉烯酶是主要耐藥機制。【關(guān)鍵詞】耐藥基因型OXA-23型碳青霉烯酶鮑曼不動桿菌多重耐藥菌株由于細(xì)菌的耐藥性不斷提高，常規(guī)的抗菌藥已不能對多重耐藥菌株進(jìn)行有效的抗感染治療。這給臨床的治療帶來了較大的困難［1］。鮑曼不動桿菌的耐藥機制較為復(fù)雜，例如對修飾酶、B-內(nèi)酰胺酶、膜孔蛋白缺損

3、、外膜蛋白的丟失等機制的研究困難較多。木文主要選擇我院2009年1月?2012年1月期間分離的62株確診為鮑曼不動桿菌的細(xì)菌對其耐亞胺培南鮑曼不動桿菌的耐藥機制進(jìn)行檢驗。1、材料與方法1.1菌株來源選擇我院2009年1月?2012年1月期間分離的62株經(jīng)半自動ATB細(xì)菌鑒定儀確診為鮑曼不動桿菌的標(biāo)木，其中有6株是對亞胺培南耐藥的鮑曼不動桿菌：200901151、201006202、、201012053、201110112>201201241c這6份菌株分別來源于ICU2份、呼吸科2份、腦外科1份、CCU1份。所有的菌株均通過半自動ATB微生物鑒定儀進(jìn)行了鑒定。1.2標(biāo)準(zhǔn)菌株高產(chǎn)A

4、mpC酶陰溝腸桿菌和TEM-26型大腸埃希菌與鮑曼不動的標(biāo)準(zhǔn)菌株及肺炎克雷伯菌ATCC700603和大腸埃希菌ATCC25922由本院實驗室進(jìn)行保存。原標(biāo)準(zhǔn)菌株均購自中國疾控CDC中心。1.3主要儀器：上海艾測電子科技有限公司生產(chǎn)的PCR儀器、檢測細(xì)菌的設(shè)備是法國梅里埃的半自動ATB、珠海TGL-16R高速冷凍離心機、海爾DW-40L92型低溫冰箱、濟南鑫貝西BSC-1100IIB2型生物安全柜、上海博迅SPX-100B-Z型細(xì)菌培養(yǎng)箱、北京六一DYY11B型電泳儀。1.4藥敏檢驗現(xiàn)有的檢測細(xì)菌的設(shè)備是法國梅里埃的半自動ATB,試劑也是梅里埃的試劑，鑒定均為上機試劑板條。藥敏為手

5、工KB紙片法與上機板條相結(jié)合。手工紙片有：磺胺異惡畔為英國Oxoid公司產(chǎn)品，阿米卡星、頭泡哌酮、慶大霉素、氧氟沙星、舒巴坦、甲氧茉噪、頭孑包咲辛、克拉維酸、頭孑包曲松、亞胺培南、頭孑包曝月虧、環(huán)丙沙星、頭抱他唳、頭砲西丁、頭孑包毗月虧、頭抱哌酮、氨曲南等，這些均是為北京天壇藥物生物技術(shù)開發(fā)公司的產(chǎn)品。PCR擴增試劑盒、染色體DNA提取試劑、質(zhì)粒堿裂解提取試劑均為上海申能博彩生物公司產(chǎn)品。瓊脂選擇的是杭州天和微生物試劑有限公司生產(chǎn)的產(chǎn)品。1.5PCR檢驗方法檢測耐藥基因采用上海艾測電子科技有限公司生產(chǎn)的PCR儀器來檢驗菌株中的耐藥基因，采用蛋白酶K法和堿裂解法對其中的染色體基因和

6、被測細(xì)菌質(zhì)粒基因進(jìn)行檢測，耐藥株選擇采用primer軟件設(shè)計引物，并且參考GenBank提供的耐藥基因，PCR的產(chǎn)物需要在含0.5μg/ml澳化乙錠的基礎(chǔ)上，在1.5%的瓊脂糖凝膠上進(jìn)行電泳，之后在紫光燈下等待結(jié)果，最后在凝膠成像系統(tǒng)上進(jìn)行成像處理。1.6三維試驗檢測ESBLs和AmpC酶參照吳偉元［4］和Coudron［3］報告的酶提取物三維試驗作部分修改進(jìn)行檢測。2、結(jié)果2.1藥敏結(jié)果：通過與基因庫的比對發(fā)現(xiàn)，所選的6株鮑曼不動桿菌人多數(shù)是多重耐藥菌株。2.2在三維試驗中：此類菌株均產(chǎn)生了ESBLs,有4株菌株產(chǎn)生了AmpC酶。2.3耐藥基因檢測：在6株鮑曼不動桿菌的耐

7、藥基因型檢測中發(fā)現(xiàn)有4株AmpC酶陽性，6株均為TEM陽性，4株為PER陽性，4株為OXA-24.VIM、IMP和VEB型等均為陰性,6株OXA-23型均陽性。3、討論導(dǎo)致醫(yī)院感染的細(xì)菌有很多，鮑曼不動桿菌就是其中較為常見的一種。隨著現(xiàn)在廣譜抗菌藥的濫用，抗生素的選擇壓力不斷加人，鮑曼不動桿菌的分離率也呈現(xiàn)出明顯的逐年上升的趨勢。本研究中的6株耐亞胺培南鮑曼不動桿菌均產(chǎn)生了OXA?23型碳青霉烯酶［2］。6株菌的擴增產(chǎn)物測序結(jié)果與目標(biāo)基因的測序結(jié)果相一致，所有基因有99%同源性。