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1、反相HPLC法測定大鼠組織中異鉤藤堿含量【摘要】目的建立測定大鼠組織中異鉤藤堿的方法。方法應(yīng)用甲醇沉淀蛋白,然后氮吹儀吹干甲醇復(fù)溶后用反相HPLC法直接測定。以Waters·RP18色譜柱(4.6mm×250mm,5μm)為固定相,前置保護柱為WondasilC18(4.0mm×10mm,5μm),甲醇-水(70∶30)含0.03%的三乙胺為流動相,流速為0.8mL/min,檢測波長為254nm。卡馬西平做內(nèi)標。結(jié)果異鉤藤堿在大鼠組織中的含量標準曲線方程為：Y＝48.558X＋0.2076(n＝6),r＝0.9996,在0.16～16.0μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,平
2、均加樣回收率為99.66%,RSD＝1.56%。結(jié)論該方法靈敏、快速、簡便,專一性和重復(fù)性好?！娟P(guān)鍵詞】異鉤藤堿；大鼠組織；含量測定；高效液相色譜法 Abstract：ObjectiveToestablishapretreatmentmthodofthetissuesampleofratandadeterminationmethodoftheconcentrationofisorhynchophyllineintissueofratsbyRP-HPLC.MethodThetissuesampleweretreatedbyaddingmethanol,andthesup
3、ernatantwasdriedbynitrogengas,theresiduewasredissolvedinmethanol,thendetectedbyRP-HPLCdirectly.Waters·RP18(4.6mm×250mm,5μm)andpre-columnWondasilC18(4.0mm×10mm,5μm)wereusedasthestationaryphase.Methanol-water(70∶30)added0.03%triethylaminewastakenas7mobilephasewithflowrateof0.8mL/min.Thewav
4、elengthofdetectionwas254nm.ResultsThestandardcurveofIsorhynchophyllineconcentratoninrattissues：Y＝48.558X＋0.2076(n＝6),r＝0.9996,itappearsagoodlinearrelationshipwithintherangeof0.16～16.0μg/mL.Theaveragerecoveryofwas99.66%,RSDwas1.56%.ConclusionThismehodissensitive,rapid,simple,specificandre
5、producible. Keywords：Isorhynchophylline；tissueofrats；contentdetermination；HPLC 異鉤藤堿(Isorhynchophylline,Isorhy)系中藥鉤藤的主要生物堿之一,具有降低血壓及明顯負性變時等效應(yīng),與擴血管藥配伍使用時,可增強降壓作用,同時可克服擴血管藥加快心率的不良反應(yīng)[1-2]。本試驗采用反相HPLC法測定大鼠組織中異鉤藤堿的含量,為后期研究異鉤藤堿在大鼠組織內(nèi)的分布,繼而對鉤藤的歸經(jīng)理論研究奠定基礎(chǔ)?！ ?儀器與試藥 日本島津LC-20A高效液相色譜儀,包括LC-20AD7高
6、壓泵工作站,SPD-20A紫外檢測器,浙江大學(xué)N2000色譜數(shù)據(jù)處理機,恒溫箱。異鉤藤堿對照品購于南昌貝塔生物科技有限公司,批號10525-080117,純度98%以上。鉤藤購于成都市新荷花飲片公司,經(jīng)西南交通大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院藥學(xué)系宋良科教授鑒定為2005年版《中華人民共和國藥典》(一部)規(guī)定入藥的鉤藤。內(nèi)標物卡馬西平購自中國藥品生物制品檢定所,批號100141-199503。甲醇為色譜純,三乙胺等其他試劑均為分析純?！ ?方法與結(jié)果 2.1色譜條件 色譜柱為Waters·RP18(4.6mm×250mm,5μm),前置保護柱為WondasilC18(4.0m
7、m×10mm,5μm)。流動相：甲醇-水(70∶30)含0.03%的三乙胺,流速：0.8mL/min,檢測波長：λ＝254nm?！ ?.2對照品和內(nèi)標儲備溶液的配制精密稱取異鉤藤堿2.0mg、內(nèi)標卡馬西平2.5mg,分別置于10mL容量瓶中,加甲醇至刻度線,得到濃度為200μg/mL的異鉤藤堿對照品儲備液和濃度為250μg/mL的卡馬西平內(nèi)標儲備液?！ ?.3樣品制備7 Wistar大鼠6只(體重在200～250g),灌服鉤藤煎液(含原藥材0.1g/mL),劑量為含原藥材1.25g/kg,連續(xù)灌胃3d,第3日灌胃2h后斷頭處死,取其肝、
