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1、吡格列酮對(duì)脂多糖引起的體外培養(yǎng)大腦皮層神經(jīng)元NO釋放的影響【摘要】目的探討吡格列酮(pioglitazon,Pio)能抑制脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)引起的培養(yǎng)大腦皮層神經(jīng)元一氧化氮釋放增加，并探討其抑制作用信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。方法以體外培養(yǎng)6～7d的乳鼠大腦皮層神經(jīng)元為研究對(duì)象,建立脂多糖損傷和吡格列酮保護(hù)模型。采用Griess法測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清液中NO含量。結(jié)果脂多糖可導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞損傷，培養(yǎng)液中NO含量升高；吡格列酮（1μmol/L）可明顯抑制脂多糖引起的NO含量的升高。結(jié)論吡格列酮可明顯拮抗脂多
2、糖誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞損傷。【關(guān)鍵詞】吡格列酮；脂多糖；神經(jīng)元；NOAbstract：ObjectiveToexploretheexpresseffectsofpioglitazon(Pio)onlipopolysaccharide-inducedNOproductiontoculturedcorticalneuronsandinvestigateitssignalingpathway.MethodsTheinflammatoryneurotoxicitymodelwasconstructedinprimarycortical
3、neuronsisolatedfromSprague-Dawleyrats6～7dneonateratsfollowingadoselipopolysaccharidetotheneuronsdirectly.ThecontentsofNOwasdetected.ResultsThecells,exposedtoLPS(10μg/mLfor8h),showedcharateristicchangeofdamage,whichcouldbe9relievedbypioglitazon(1μmol/L)withcellsur
4、vivalrateincrement.PioglitazonecouldblocktheincreaseofNOinducedbyLPS.ConclusionsPioglitazonecanpreventtheneuronsfromthedamageofLPSinflammatoryneurotoxicity.Keywords:pioglitazon;lipopolysaccharide;neurons;NO近年來(lái)的研究已顯示腦內(nèi)炎癥反應(yīng)參與了阿爾茨海默病(Alzheimer’sdisease，AD)以及帕金森病(Par
5、kinsonisease,PD)等神經(jīng)元變性疾病的發(fā)病過(guò)程［1］。脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）是一種以氨基苷為組成單位的磷脂，構(gòu)成革蘭陰性菌細(xì)胞壁成分，是一種強(qiáng)效的炎癥反應(yīng)誘導(dǎo)劑。Heneka等研究表明布洛芬和吡格列酮可以通過(guò)激活過(guò)氧化物酶增殖物激活受體(peroxisomeproliferators-activatedreceptor,PPAR)γ受體減輕神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的炎癥反應(yīng)［2］。XingB等研究指出，吡格列酮對(duì)抗脂多糖誘導(dǎo)的多巴胺能神經(jīng)元損傷通過(guò)抑制誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)表達(dá)和N
6、O的產(chǎn)生［3］。NO是體內(nèi)廣泛存在的一種細(xì)胞信使分子，具有生理性代償和病理性神經(jīng)毒雙重作用。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)體外培養(yǎng)乳鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞，經(jīng)LPS刺激造成神經(jīng)元損傷模型，觀察吡格列酮是否能抑制LPS引起的神經(jīng)元NO釋放增加，同時(shí)探討吡格列酮抑制NO釋放的可能的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。91材料與方法1.1藥品和試劑吡格列酮由Takeda公司提供(批號(hào)：060901，純度>99%)，用二甲基亞砜溶解。二甲基亞砜、脂多糖、DMEM、F12、胰蛋白酶（1∶250）、L-多聚賴氨酸購(gòu)于SIGMA公司；GW9662(貨號(hào)：CAY-70785-M
7、001)、SP600125(貨號(hào)：JBS-INH-006-M002)購(gòu)于廈門勵(lì)遠(yuǎn)有限公司；一氧化氮檢測(cè)試劑盒（貨號(hào)：S0021）購(gòu)于碧云天生物技術(shù)研究所；胎牛血清、HEPES、馬血清購(gòu)于北京華美轉(zhuǎn)導(dǎo)科技有限公司；臨用前用DMEM稀釋到所需濃度，其余試劑均為分析純。1.2大腦皮層神經(jīng)元細(xì)胞原代培養(yǎng)參照文獻(xiàn)［4］,取出生24h內(nèi)的SD大鼠乳鼠,75%酒精浸泡消毒，無(wú)菌條件下取出大腦皮層，置于培養(yǎng)基中，剔除血管和軟腦膜，用培養(yǎng)基清洗1～2次。將腦組織移入另一含培養(yǎng)基的容器中，然后剪成1mm3大小的組織塊。加入0.125%胰蛋白
8、酶溶液37℃消化10min,并不時(shí)輕輕吹打。待大部分細(xì)胞分散后，即加入完全培養(yǎng)基終止消化。200目篩網(wǎng)過(guò)濾,1000轉(zhuǎn)離心10min,用含10%胎牛血清、10%馬血清的完全培養(yǎng)基將細(xì)胞制成懸液,調(diào)整細(xì)胞密度,以5×105/mL接種在多聚賴氨酸處理過(guò)的培養(yǎng)板中,置于37℃、5%CO29培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。48h后加入含阿糖胞
