hplc法測定輻花中獐牙菜苦苷的含量

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1、HPLC法測定輻花中獐牙菜苦苷的含量作者：張秀橋,黃鳳嬌,陳家春,劉焱文【摘要】目的建立輻花中獐牙菜苦苷含量測定的方法。方法用高效液相色譜法,色譜柱為AlltimalC18(5μm,250mm×4.6mm),流動相為甲醇-水(水中含0.05%磷酸),梯度洗脫,流速1mL/min,檢測波長234nm,柱溫30℃。結(jié)果獐牙菜苦苷在3.10～30.98μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)為0.9991；平均回收率為98.0%,RSD＝2.66%(n＝6)。結(jié)論該方法操作簡便,分離度好,為建立其質(zhì)量標準提供了實驗依據(jù)?！娟P(guān)鍵詞】輻花；高

2、效液相色譜法；獐牙菜苦苷；含量測定Abstract：ObjectiveToestablishamethodforcontentdeterminationofswertiamarininLomatogoniopsisalpina.MethodsHPLCmethodfordeterminationwasused.Chromatographiccolumn：AlltimalC18(250mm×4.6mm,5μm).Mobilephase：methanol-water(including0.05%H3PO4),andgradient

3、elution.Flowrate：1mL/min.Wavelength：234nm.Columntemperture：30℃.ResultsThecalibrationcurveofswertiamarinwasingoodlinearityovertherangeof3.10～30.98(r=0.9991).Theaveragerecoverieswere98.0%,withRSD＝2.66%(n＝6).ConclusionItis6asimpleandsensitivemethodincontrollingthequal

4、ityofLomatogoniopsisalpina.　　Keywords：Lomatogoniopsisalpina；HPLC；swertiamarin；determination輻花來源于龍膽科輻花屬植物LomatogoniopsisalpinaT.N.HoetS.W.Liu,主要產(chǎn)于西藏東北部、青海南部及四川等地,生于云杉林緣、陰坡草甸及灌叢草甸中。輻花是國務(wù)院于1999年8月4日批準的《國家重點保護野生植物名錄(第一批)》保護級別為Ⅱ級的品種之一。為了變野生為家種,為建立其質(zhì)量標準提供實驗依據(jù),本試驗用HPLC法測定

5、了輻花中獐牙菜苦苷(swertiamarin)的含量?！　?儀器與試藥　　美國Agilent1100高效液相色譜儀(G1311A泵、柱溫箱、G1316A紫外檢測器、Shemstation色譜工作站),SartoriusBP211D分析天平?！　∷幉牟勺运拇ㄊ“沃萁鸫h俄熱,經(jīng)華中科技大學同濟醫(yī)學院陳家春教授鑒定為龍膽科輻花屬植物LomatogoniopsisalpinaT.N.HoetS.W.Liu。6　　對照品獐牙菜苦苷自提,HPLC歸一法測定純度>98%。甲醇為色譜純,水為重蒸水,均經(jīng)0.45μm濾膜濾過?！　?

6、方法和結(jié)果　　2.1色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性試驗色譜柱為AlltimalC18(250mm×4.6mm,5μm)。流動相為甲醇-水(水中含0.05%磷酸),梯度洗脫,0～25min,甲醇由20%增至50%；25～35min,甲醇由50%增至60%；流速1mL/min。檢測波長234nm,柱溫30℃。理論塔板數(shù)均>104,對稱因子0.95～1.05。色譜圖見圖1。　　2.2供試品溶液的制備　　2.2.1對照品溶液的制備　　分別精密稱取對照品獐牙菜苦苷一定量,混合后用甲醇超聲溶解并定容,制成濃度分別為1.549mg/mL的溶液

7、,經(jīng)0.45μm濾膜濾過,濾液作為對照品溶液?！　?.2.2樣品溶液的制備6　　取輻花全草0.5kg,置45℃烘箱干燥至恒重,粉碎,過80目篩,混合均勻后取約0.25g,精密稱定。用約8mL甲醇浸泡過夜,超聲提取2次,每次30min,濾過。合并濾液,濾液水浴蒸干后用甲醇定容至10mL,經(jīng)0.45μm濾膜濾過,濾液作為樣品溶液?！　?.3方法學考察　　2.3.1線性關(guān)系考察試驗　　取上述對照品溶液,分別進樣2、4、8、10、12、16、18、20μL(n＝2),以進樣量為橫坐標、峰面積為縱坐標進行回歸計算,獐牙菜苦苷回歸方程為

8、：Y＝594.29X＋127.34,r＝0.9991,進樣量在3.10～30.98μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好?！　?.3.2精密度試驗　　取對照品溶液,重復進樣5次,每次10μL,計算峰面積,RSD＝0.93%,結(jié)果表明精密度良好?！　?.3.3重復性試驗　　取同一批樣品5份,按“2.2.2”