hplc法測(cè)定輻花中獐牙菜苦苷的含量

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1、HPLC法測(cè)定輻花中獐牙菜苦苷的含量張秀橋,黃鳳嬌,陳家春,劉焱文【摘要】目的建立輻花中獐牙菜苦苷含量測(cè)定的方法。方法用高效液相色譜法,色譜柱為AlltimalC18(5μm,250mm×4.6mm),流動(dòng)相為甲醇-水(水中含0.05%磷酸),梯度洗脫,流速1mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)234nm,柱溫30℃。結(jié)果獐牙菜苦苷在3.10～30.98μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)為0.9991；平均回收率為98.0%,RSD＝2.66%(n＝6)。結(jié)論該方法操作簡(jiǎn)便,分離度好,為建立其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)?！娟P(guān)鍵詞】輻

2、花；高效液相色譜法；獐牙菜苦苷；含量測(cè)定Abstract：ObjectiveToestablishamethodforcontentdeterminationofsarininLomatogoniopsisalpina.MethodsHPLCmethodfordeterminationatographiccolumn：AlltimalC18(250mm×4.6mm,5μm).Mobilephase：methanol-L/min..Columntemperture：30℃.ResultsThecalibration

3、curveofsarinpleandsensitivemethodincontrollingthequalityofLomatogoniopsisalpina.　　Keyatogoniopsisalpina；HPLC；sarin；determination輻花來(lái)源于龍膽科輻花屬植物L(fēng)omatogoniopsisalpinaT.N.HoetS.station色譜工作站),SartoriusBP211D分析天平?！　∷幉牟勺运拇ㄊ“沃萁鸫h俄熱,經(jīng)華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院陳家春教授鑒定為龍膽科輻花屬植物L(fēng)omatog

4、oniopsisalpinaT.N.HoetS.濾膜濾過(guò)?！　?方法和結(jié)果　　2.1色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)色譜柱為AlltimalC18(250mm×4.6mm,5μm)。流動(dòng)相為甲醇-水(水中含0.05%磷酸),梯度洗脫,0～25min,甲醇由20%增至50%；25～35min,甲醇由50%增至60%；流速1mL/min。檢測(cè)波長(zhǎng)234nm,柱溫30℃。理論塔板數(shù)均>104,對(duì)稱因子0.95～1.05。色譜圖見(jiàn)圖1。　　2.2供試品溶液的制備　　2.2.1對(duì)照品溶液的制備　　分別精密稱取對(duì)照品獐牙菜苦苷

5、一定量,混合后用甲醇超聲溶解并定容,制成濃度分別為1.549mg/mL的溶液,經(jīng)0.45μm濾膜濾過(guò),濾液作為對(duì)照品溶液?！　?.2.2樣品溶液的制備　　取輻花全草0.5kg,置45℃烘箱干燥至恒重,粉碎,過(guò)80目篩,混合均勻后取約0.25g,精密稱定。用約8mL甲醇浸泡過(guò)夜,超聲提取2次,每次30min,濾過(guò)。合并濾液,濾液水浴蒸干后用甲醇定容至10mL,經(jīng)0.45μm濾膜濾過(guò),濾液作為樣品溶液?！　?.3方法學(xué)考察　　2.3.1線性關(guān)系考察試驗(yàn)　　取上述對(duì)照品溶液,分別進(jìn)樣2、4、8、10、12、16、18、

6、20μL(n＝2),以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸計(jì)算,獐牙菜苦苷回歸方程為：Y＝594.29X＋127.34,r＝0.9991,進(jìn)樣量在3.10～30.98μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好?！　?.3.2精密度試驗(yàn)　　取對(duì)照品溶液,重復(fù)進(jìn)樣5次,每次10μL,計(jì)算峰面積,RSD＝0.93%,結(jié)果表明精密度良好?！　?.3.3重復(fù)性試驗(yàn)　　取同一批樣品5份,按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備樣品溶液并測(cè)定含量,RSD＝0.48%,結(jié)果表明重復(fù)性良好。　　2.3.4穩(wěn)定性試驗(yàn)　　取同一樣品溶液,在1d內(nèi)分別于0、2、4、

7、8、12h進(jìn)樣,計(jì)算峰面積,RSD＝0.45%,結(jié)果表明樣品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定?！　?.3.5加樣回收試驗(yàn)　　取已知含量的同一批貴州獐牙菜全草6份,精密稱定,加入獐牙菜苦苷標(biāo)準(zhǔn)品適量,按“2.2.2”項(xiàng)下制備,計(jì)算回收率,結(jié)果見(jiàn)表1。表1回收率試驗(yàn)結(jié)果(略)　　2.4樣品測(cè)定取不同產(chǎn)地的樣品3批,按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備樣品溶液,以上述色譜條件測(cè)定,進(jìn)樣20μL,測(cè)定峰面積,計(jì)算其含量,結(jié)果見(jiàn)表2。表2樣品含量測(cè)定結(jié)果(略)　　3討論試驗(yàn)考察了甲醇回流提取和超聲提取等條件下的提取率,結(jié)果提示,回流提取時(shí)獐牙菜

8、苦苷成分部分被破壞,故采用超聲提取。超聲提取時(shí)考察了藥材粉碎度以及是否浸泡過(guò)夜的提取率,結(jié)果提示,過(guò)80目篩后用甲醇浸泡過(guò)夜,再超聲提取2次,每次30min,可提取完全。