兩種檢測(cè)淋病奈瑟菌方法的比較

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1、兩種檢測(cè)淋病奈瑟菌方法的比較【關(guān)鍵詞】PCR；淋病奈瑟菌；淋球菌培養(yǎng)　　［摘要］目的：比較兩種檢測(cè)淋病奈瑟菌（NG）的方法。方法：采用熒光定量PCR檢測(cè)法和NG培養(yǎng)法。對(duì)155例臨床分泌物標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果：熒光定量PCR檢測(cè)陽性率15.5%，培養(yǎng)方法陽性率4.5%.。兩者比較PCR方法陽性率顯著高于培養(yǎng)法（P<0.05）。結(jié)論：對(duì)NG的檢測(cè)，熒光定量PCR檢測(cè)法更適合，并且可有效減少假陰性?！　。坳P(guān)鍵詞］PCR；淋病奈瑟菌；淋球菌培養(yǎng)　　淋病是國(guó)內(nèi)外最常見的性傳播疾病之一,它嚴(yán)重影響著人們的身心健康,其病原體為淋病奈瑟氏菌(簡(jiǎn)稱淋球菌，NG)。檢測(cè)淋球菌的方法有很多，

2、最主要的現(xiàn)在是聚合酶鏈反應(yīng)（簡(jiǎn)稱PCR）和細(xì)菌培養(yǎng)法兩種。2005年下半年我們對(duì)155例門診疑似患者取樣進(jìn)行了這兩種方式的比較，通過統(tǒng)計(jì)學(xué)處理認(rèn)為FQPCR法提高了淋球菌檢測(cè)的準(zhǔn)確性，也減少了淋球菌的漏檢率?！　?　材料與方法　　1.1　材料5　　1.1.1　標(biāo)本來源與采集　　　　　　　　標(biāo)本來源于我院2005年9月至12月日常婦科門診和男性科門診及泌尿外科門診的155例疑似患者，年齡最大的59歲，最小的18歲，其中女性患者96例，男性患者59例。標(biāo)本采集：男性用無菌拭子由前尿道2cm~4cm處取尿道分泌物，根據(jù)病情需要，也可取前列腺按摩液或精液。女性用女性拭子在宮頸管內(nèi)1cm~

3、2cm處取宮頸分泌物，在取宮頸標(biāo)本時(shí)，應(yīng)先用拭子將宮頸揩干凈，再用另一個(gè)拭子取材。用拭子取材時(shí)，要在宮頸（或尿道）內(nèi)旋轉(zhuǎn)并至少停留20s以上，以便獲得較好的細(xì)胞?！　?.1.2　儀器及試劑盒　　　　　　　　　熒光定量PCR儀為美國(guó)生產(chǎn)的ABI7000型，所用PCR試劑盒為深圳匹基生物工程股分有限公司生產(chǎn)；生物梅里埃公司生產(chǎn)的APINH奈瑟氏菌及嗜血桿菌鑒定系統(tǒng)?！　?.2　方法　　1.2.1　熒光定量PCR法　　　　　　　　　取100μl待測(cè)樣本，加入100μlDNA提取液1，振蕩混勻。13000r/min離心155min，吸棄上清（離心時(shí)注意離心管方向，盡可能吸棄上清且不碰沉淀

4、）。加入50μlDNA提取液2，振蕩混勻。100℃干浴10min，13000r/min離心10min，保留上清待用（如標(biāo)本裂解產(chǎn)物當(dāng)天不使用，則保存于-20℃。按試劑盒配制試劑，加入處理好的標(biāo)本上機(jī)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。循環(huán)條件設(shè)置：37℃：5min;94℃:1min;95℃:5s,60℃:30s,40個(gè)循環(huán)。反應(yīng)體系設(shè)為40μl。　　1.2.2　NG菌培養(yǎng)　　　　　　　　　采用淋球菌巧克力培養(yǎng)基，按試劑盒操作要求將拭子進(jìn)行接種，在5%CO2溫箱35℃培養(yǎng)48h~72h。挑取可疑菌落進(jìn)行革蘭染色，如鏡檢可見革蘭陰性腎形雙球菌，則進(jìn)行APINH奈瑟菌鑒定系統(tǒng)鑒定。該系統(tǒng)利用標(biāo)準(zhǔn)化及微量化

5、試驗(yàn)并擁有與之相適應(yīng)的數(shù)據(jù)庫(kù)。APINH試驗(yàn)條有10個(gè)微孔管，內(nèi)有干燥基質(zhì)，可進(jìn)行12項(xiàng)鑒定反應(yīng)（酶反應(yīng)或糖發(fā)酵），并能測(cè)青霉素酶。孵育時(shí)所發(fā)生的各種反應(yīng)可通過自發(fā)或加入試劑后顏色改變測(cè)出。在35℃~37℃培養(yǎng)2h后即可目視判讀。參照使用手冊(cè)的反應(yīng)模式表即可得到結(jié)果?！　?.3　統(tǒng)計(jì)學(xué)處理　　　　　　　　　對(duì)155例疑似患者所進(jìn)行的熒光定量PCR法和細(xì)菌培養(yǎng)法檢出率的比較分別用χ2檢驗(yàn)。5　　2　結(jié)果　　見表1。表1　兩種方法檢出結(jié)果（略）　　3　討論　　NG是常見的性傳播性疾病病原體，主要通過性接觸直接感染泌尿生殖道、口咽部和肛門直腸黏膜，或在分娩時(shí)通過產(chǎn)道感染新生兒，臨床表現(xiàn)

6、為：?jiǎn)渭冃粤懿?，臨床癥狀為尿頻、尿急、尿痛，尿道口膿性分泌物；子宮頸紅腫、陰道分泌物增多和排尿困難；盆腔炎，表現(xiàn)為子宮內(nèi)膜、輸卵管、盆腔的淋菌性炎癥；口咽部和肛門直腸病；淋菌性結(jié)膜炎，發(fā)生于新生兒產(chǎn)道感染，眼部大量膿性分泌物，治療不及時(shí)可致盲；播散性淋病表現(xiàn)為畏寒、發(fā)熱、皮膚損害和關(guān)節(jié)炎癥，少量患者可致化膿性關(guān)節(jié)炎和腦膜炎。培養(yǎng)法檢測(cè)NG，用于分離培養(yǎng)的標(biāo)本直接接種于營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中，立即置于5%CO2氣體條件下35℃~37℃孵育48h~725h，再進(jìn)行鑒定。雖然培養(yǎng)法的特異性和準(zhǔn)確性都非常高，但由于標(biāo)本取材不理想及標(biāo)本中混有其他雜菌及NG離體后易死亡等因素均可能影響該菌的陽性檢出率

7、。漏檢率因此也相當(dāng)高，且不易作出早期診斷，臨床醫(yī)生不歡迎使用該法。熒光定量PCR法檢測(cè)NG屬一種基因診斷技術(shù)，它借助于一種DNA擴(kuò)增技術(shù)，能將含微量的淋球菌標(biāo)本處理擴(kuò)增。自2002年1月衛(wèi)生部下發(fā)了有關(guān)基因擴(kuò)增檢驗(yàn)技術(shù)臨床應(yīng)用的法規(guī)性文件《臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理暫行辦法》（衛(wèi)醫(yī)發(fā)［2002］10號(hào)）和衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心配發(fā)的《臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范》（衛(wèi)檢字［2002］8號(hào)）以來，對(duì)臨床PCR實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行了規(guī)范化管理和驗(yàn)收。在日常工作中嚴(yán)格執(zhí)行質(zhì)量保證體系中各種標(biāo)準(zhǔn)操作