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《幽門螺桿菌igg抗體膠體金免疫層析快速診斷試紙條的研制》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、幽門螺桿菌IgG抗體膠體金免疫層析快速診斷試紙條的研制【摘要】?目的?建立一種快速檢測(cè)抗H.pyloriIgG抗體的膠體金免疫層析試紙條，并優(yōu)化制備中各關(guān)鍵步驟的實(shí)驗(yàn)條件。方法?以檸檬酸三鈉還原法制備20nm的膠體金溶液，葡萄球菌A蛋白（SPA），制備免疫膠體金復(fù)合物，組裝膠體金免疫層析快速診斷試紙條。結(jié)果?用檸檬酸還原法制備的20nm膠體金溶液呈亮紅色。膠體金標(biāo)記SPA的最低穩(wěn)定濃度5μg/ml，最適穩(wěn)定量為6μg/ml。SPA標(biāo)記的最適pH為6.0。以此試紙條檢測(cè)臨床血清標(biāo)本與進(jìn)口ELISA試劑盒比較，組間陽性率比較差異無顯著性。結(jié)論?膠體金免疫層析試紙條質(zhì)量穩(wěn)
2、定性不但與抗原抗體的選擇、用量?jī)?yōu)化、層析材料的選擇、膠體金的制備與標(biāo)記等因素密切相關(guān)，而且緩沖系統(tǒng)的優(yōu)化、輔助添加劑的選擇與優(yōu)化組合也非常重要。???【關(guān)鍵詞】?幽門螺桿菌；膠體金；免疫層析檢測(cè)?? ResearchondevelopmentofgoldimmunochromatographictestkitforserumH.pyloriantibodyIgG 【Abstract】?Objective?DevelopinggoldimmunochromatographictestkitforserumH.pyloriantibodyIgGandoptimize
3、thekeyexperimentconditions.Methods?Preparingthecolloidgoldparticlesof20nmwhichwerecoupledwithStreptococcusproteinA(SPA)，setupthegoldimmunochromatographytestkitforserumH.pyloriantibodyIgG.Results?Thespheroidalcolloidgoldparticlesof20nmisshownincolorofbrightred.Theminimalstableconcentrat
4、ion(MSC)ofgold-SPAis5μg/ml，andthesuitablestableconcentration(SSC)is6μg/ml.ThepH6.0isappropriate.53serasamplesweretestedbyGICAandELISA，thereisonsignificantdifferencebetweentwomethods.Conclusion?Thequalityofgoldimmunochromatographytestkitisassociatedwiththefactors，suchasthequalityandquan
5、tityofantigenorantibody，colloidgoldparticles，buffers，etc. 【Keywords】?helicobacterpylori;colloidgold;goldimmunochromatographicassay???在幽門螺桿菌（Helicobacterpylori，Hp）感染的診斷中，細(xì)菌培養(yǎng)、組織病理學(xué)檢查、尿素酶試驗(yàn)、呼氣試驗(yàn)等方法或因?yàn)榻o患者造成的侵入性痛苦，或需要一定的條件和技術(shù)，或因?yàn)樾枰厥鈨x器，或因?yàn)橘M(fèi)用昂貴等，其臨床推廣及多次重復(fù)追蹤復(fù)查受到限制。而血清學(xué)檢測(cè)因其非侵入性、快速、準(zhǔn)確，可同時(shí)處理大
6、量標(biāo)本，檢測(cè)不同類型的抗體，在臨床檢驗(yàn)、基礎(chǔ)研究中倍受青睞。20世紀(jì)80年代興起的膠體金免疫層析檢測(cè)（goldimmunochromagraphyassay，GICA），操作簡(jiǎn)單快捷、結(jié)果清晰易于判斷、無需復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)技能和特殊設(shè)備，特別適于基層衛(wèi)生單位使用。本研究預(yù)采用H.pylori超聲全菌體抗原、葡萄球菌A蛋白（SPA）抗原，嘗試研制一種根據(jù)雙抗原夾心法檢測(cè)原理檢測(cè)血清、唾液中抗H.pylori的IgG抗體的膠體金免疫層析檢測(cè)試劑，優(yōu)化膠體金免疫層析快速診斷試紙條研制各關(guān)鍵步驟的實(shí)驗(yàn)條件，為進(jìn)一步研制和開發(fā)奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)?！ ??材料與方法 1.1?材料? 幽
7、門螺桿菌菌種SS1為軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物與流行病研究所保存；TSB肉湯（Trypticsoybroth）為DIFCO公司產(chǎn)品；氯金酸（HAuCl4.H2O），上海化學(xué)試劑公司產(chǎn)品；檸檬酸三鈉（Na3C6H5O7.2H2O），北京北化精細(xì)化學(xué)品有限公司產(chǎn)品；葡萄球菌A蛋白（SPA）、牛血清白蛋白（BSA），均為Sigma公司產(chǎn)品；聚乙二醇（PEG20000），F(xiàn)LUKA公司產(chǎn)品;以上試劑均為分析純。厭氧培養(yǎng)罐AnaeroPackRectangularJar為三菱化學(xué)公司產(chǎn)品?！ ?.2?方法 1.2.1?玻璃器皿的清潔? 制備膠體金的所用容器均應(yīng)反復(fù)清洗，并硅
