肺炎支原體肺炎的診斷

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1、肺炎支原體肺炎的診斷空軍總醫(yī)院劉春靈支原體是介于細(xì)菌和病毒之間的一類缺乏細(xì)胞壁、呈高度多型性、能通過濾菌器、可在無生命培養(yǎng)基中生長繁殖的最小原核細(xì)胞型微生物。迄今分離到的支原體已達(dá)150余種，已確定與人類疾病關(guān)系最大的有3種，肺炎支原體（mycoplasmapneumonia,MP）是其中的一種。MP在國內(nèi)外都是兒童和成人呼吸道感染的重要病原體之一，主要導(dǎo)致肺炎，所有肺炎的15-20%，約50%的兒童和青少年肺炎是由MP引起的.因此MP肺炎（MPpneumonia,MPP）是常見病和多發(fā)病。但迄今為

2、止，MPP仍缺乏快速、可靠的診斷試驗，因而臨床確診困難。MPP的診斷包含兩個層面：臨床診斷（經(jīng)驗性）和結(jié)合了實驗室病原學(xué)檢測的確定診斷。一、MPP臨床診斷：根據(jù)流行病學(xué)、臨床癥狀、體征、實驗室輔助檢查等特點(diǎn)經(jīng)驗性綜合判斷而出。MPP有著不同于一般感染性疾病的的特點(diǎn)：一般肺炎多發(fā)于冬季，MPP一年四季均可發(fā)病，但多發(fā)生于夏秋季節(jié)；臨床癥狀大多只有發(fā)熱和咳嗽；外周血白細(xì)胞總數(shù)大多不高；疾病早期X線檢查即可出現(xiàn)肺炎，約10%-20%的病例會出現(xiàn)肺不張；因MP無細(xì)胞壁，臨床常用的、作用于細(xì)胞壁的、安全性高的

3、治療肺炎的藥物如β-內(nèi)酰胺類的青霉素類、頭孢類抗生素對其無作用；因此易被誤診為病毒性肺炎。綜合上述特點(diǎn)，可作出初步的經(jīng)驗性臨床診斷。二、實驗室病原學(xué)診斷：包括直接病原體檢測和血清學(xué)檢測。下面介紹幾種常用或經(jīng)典的MP實驗室診斷方法。（一）直接病原體檢測：主要有MP分離培養(yǎng)和聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）法檢測MP-DNA。檢測用標(biāo)本可取自可疑患者呼吸道的痰、咽拭子、鼻咽吸出物、支氣管肺泡灌洗液、胸水等。1、MP分離培養(yǎng)與鑒定：MP很挑剔，培養(yǎng)基的營養(yǎng)要求比一般細(xì)菌高，生長速度慢，較一般細(xì)菌難培養(yǎng)；分離培養(yǎng)需要

4、10-14天，而通常需要2-5周才能生長成肉眼可見的菌落。通過生化反應(yīng)和免疫學(xué)方法進(jìn)行鑒定。還有其它影響因素，如MPP無細(xì)胞壁，對環(huán)境的影響更為敏感，易被滅活；標(biāo)本采集后接種到培養(yǎng)基的過程也是培養(yǎng)可能失敗的一個環(huán)節(jié)。由于其費(fèi)時、費(fèi)力、陽性率低，實際臨床已經(jīng)棄用此方法，目前主要用于研究性項目。2、PCR法檢測MP-DNA：PCR是一種模擬體內(nèi)DNA復(fù)制的體外擴(kuò)增法，以其靈敏性、特異性高，檢測所需時間短，能夠直接從標(biāo)本中檢出病原體并可定量及分型，已廣泛應(yīng)用于各種感染性疾病的診斷中，如SARS、禽流感、A

5、/H1N1流感的確診都主要用此方法。常用于MP檢測的是雙引物兩次擴(kuò)增反應(yīng)的套（巢）氏PCR（nestedPCR，nPCR）和基于熒光能量傳遞技術(shù)的實時定量PCR（real-timequantitativePCR），其中實時定量PCR可以檢測到少于5個基因拷貝的MP。美國1996年的一次MP感染暴發(fā)的流行病學(xué)調(diào)查，對部分患病者的呼吸道分泌物以PCR檢測MP-DNA陽性率為57%，同樣患者的MP培養(yǎng)陽性率僅5%。3、直接鏡檢：MP沒有細(xì)胞壁而沒有固有型態(tài)而呈高度多型性，且革蘭氏染色不易著色，因此難于用光

6、學(xué)顯微鏡觀察。（二）血清學(xué)檢測：檢測MPP患者血清抗體有多種方法，傳統(tǒng)、經(jīng)典和常用的有4種，為冷凝集試驗、補(bǔ)體結(jié)合試驗、間接血凝試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗。1、冷凝集試驗（CA）:MP感染后患者血清中產(chǎn)生一種非特異性冷凝集素（IgM型），可能是MP作用于紅細(xì)胞Ⅰ型抗原，使其變性后產(chǎn)生的自身抗體。將患者的稀釋血清與人O型紅細(xì)胞混合，4℃過夜，觀察紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象，放37℃后其凝集現(xiàn)象消失，故稱為冷凝集試驗。Garrow建立了一種快速方法：取0.2ml全血，加0.2ml3.8%枸櫞酸納混合，置于0-4℃冰箱中

7、15-30秒取出，傾斜試管觀察凝集情況，如有粗大絮狀顆粒是為陽性。僅有50%左右的MPP患者冷凝集試驗陽性，一般在發(fā)病一周末或第二周開始時出現(xiàn)，2-3月后消失。但傳染性單核細(xì)胞增多癥、流感、風(fēng)疹、腮腺炎、腺病毒感染和其他病毒性疾病也可出現(xiàn)低效價陽性，因此冷凝集試驗的特異性不高，只能作為輔助診斷指標(biāo)。2、補(bǔ)體結(jié)合試驗（CF）:補(bǔ)體結(jié)合試驗是一種傳統(tǒng)的免疫學(xué)技術(shù)，是用免疫溶血機(jī)制做指示系統(tǒng)，來檢測另一反應(yīng)系統(tǒng)抗原或抗體的試驗。如試驗血清中不含抗體，則補(bǔ)體不被結(jié)合，在指示系統(tǒng)中能引起溶血；如有抗體存在，則

8、指示系統(tǒng)不發(fā)生溶血。早在1906年Wasermann就將其應(yīng)用于梅毒的診斷，即著名的華氏反應(yīng)。CF的優(yōu)點(diǎn)是：①靈敏度高：補(bǔ)體活化過程有放大作用。②特異性強(qiáng)：各種反應(yīng)成分事先都經(jīng)過滴定，選擇了最佳比例，出現(xiàn)交叉反應(yīng)的機(jī)率較小。但是補(bǔ)體結(jié)合試驗參與反應(yīng)的成分多，影響因素復(fù)雜，操作步驟繁鎖并且要求十分嚴(yán)格，稍有疏忽便會得出不正確的結(jié)果，所以多已被其他更易被接受的方法所取代。對于MPP患者，補(bǔ)體結(jié)合試驗檢測的主要是MP-IgM抗體。3、間接血凝試驗：是以紅細(xì)胞作為載體的間接凝