肺炎支原體肺炎的診斷（醫(yī)學(xué)論文）

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1、肺炎支原體肺炎的診斷肺炎支原體(Mycoplasmapneumoniae,MP)肺炎是肺炎支原體引起的急性呼吸道感染伴肺炎，過去曾稱為Eaton因子性肺炎、冷凝集素肺炎。實(shí)驗(yàn)室檢查—般實(shí)驗(yàn)室檢查:白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類可能不高，但血沉和C反應(yīng)蛋白(CRP)可能升高，尿常規(guī)、肝腎功能、電解質(zhì)沒有異常變化。支原體肺炎的特異性實(shí)驗(yàn)室檢查：培養(yǎng)、非培養(yǎng)及血清學(xué)診斷方法如下。1?肺炎支原體分離培養(yǎng)⑴標(biāo)本的采集及保存:咽拭子或血液、痰、胸腔積液、支氣管肺泡灌洗物、氣管吸液和肺組織均可作為肺炎支原體培養(yǎng)標(biāo)本。拭子應(yīng)以藻酸鈣、滌綸、聚酯纖維材料制作，柄為塑料或鋁質(zhì)。木質(zhì)或竹質(zhì)的棉拭子不宜使用，因?yàn)榭赡芎袧撛诘闹?/p>

2、原體抑制物。取標(biāo)本時(shí)持拭子用力擦下盡可能多的細(xì)胞，因?yàn)橹гw常與細(xì)胞相伴隨。標(biāo)本采集過程中應(yīng)當(dāng)避免被滑石粉和防腐劑污染。支原體對(duì)外界不利的環(huán)境非常敏感，尤其是干燥和熱，因此無論何時(shí)采集標(biāo)本后都應(yīng)立即置于支原體運(yùn)輸液或培養(yǎng)基內(nèi)，如SP-4肉湯或2SP(含10%滅活胎牛血清的0?2mol/L的蔗糖磷酸鹽緩沖液)。保存液或運(yùn)輸液也可使用商業(yè)成品。如液體或濕的組織標(biāo)本能保證不干涸，且在1小時(shí)內(nèi)接種，則可不使用保存液或運(yùn)輸液。標(biāo)本采集后如果不能立即運(yùn)輸，應(yīng)置于41冷藏；如果標(biāo)本采集后24小時(shí)內(nèi)不能接種，應(yīng)置于—709或液氮內(nèi)保存。如以一2CTC保存，即使很短時(shí)間也會(huì)使支原體失去活性。⑵培養(yǎng)步驟：SP-

3、4及改良的Hayflict肉湯和瓊脂平板可用于肺炎支原體的培養(yǎng)。肺炎支原體培養(yǎng)時(shí)，無論是自制培養(yǎng)基還是使用商業(yè)成品培養(yǎng)基，均需使用陽(yáng)性和陰性對(duì)照菌株以保證培養(yǎng)基的質(zhì)量。肺炎支原體的培養(yǎng)使用雙相培養(yǎng)基（肉湯-瓊脂培養(yǎng)技術(shù)）則更好。標(biāo)本在接種前應(yīng)適當(dāng)混勻。液體標(biāo)本離心沉淀，取沉淀物用于接種;組織標(biāo)本在肉湯內(nèi)磨碎后接種。無論是液體標(biāo)本還是磨碎后的組織標(biāo)本，均需在接種前做系列稀釋至I：1000以下，每一稀釋度均接種（如I：10,1:100,1:1000）,稀釋液是肉湯培養(yǎng)基。稀釋的目的是克服標(biāo)本中可能存在的抗生素、抗體和細(xì)菌的兆百干擾，是提高陽(yáng)性分離率的重要步驟。將系列稀釋后的標(biāo)本接種于SP-4肉湯

4、和瓊脂平板上；接種后的肉湯置于有氧環(huán)境，瓊脂平板置5%的C02培養(yǎng)箱或燭缸中，兩者的溫度均為37°Co如培養(yǎng)環(huán)境干燥或培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng),可使用加濕溫箱。如果接種的肉湯在4日后顏色由紅變黃，則應(yīng)檢查原種的瓊脂平板是否有菌落生長(zhǎng)；如果沒有，則將陽(yáng)性肉湯轉(zhuǎn)種瓊脂平板，過4日以后每2?3日檢查原種和轉(zhuǎn)種的瓊脂平板,一般在接種后4?20日產(chǎn)生直徑為10?lOOyni的菌落;如果肺炎支原體鑒定陽(yáng)性則報(bào)告“肺炎支原體”,如果陰性則報(bào)告“支原體種”o如果原種培養(yǎng)基的肉湯在10?21日內(nèi)沒有顏色改變，則將該肉湯轉(zhuǎn)種瓊脂平板；6周后仍然沒有菌落產(chǎn)生，報(bào)告“陰性”o肉湯培養(yǎng)基混濁顯示細(xì)菌污染。(3)培養(yǎng)物的鑒定：肺炎

5、支原體沒有細(xì)胞壁，故不能被革蘭染料所染色，因此革蘭染色不能用于支原體的鑒定，但可排除細(xì)菌污染的存在。姬姆染色不能將支原體與標(biāo)本中的碎片顆粒區(qū)別。DNA熒光染料，如Hoechst332558,可用于確定標(biāo)本或培養(yǎng)物中的支原體存在,但不能與其他細(xì)菌區(qū)別。用放大鏡可檢查瓊脂平板上的支原體菌落，但用4?10倍的顯微鏡更為可靠。檢查時(shí)不僅要注意始劃區(qū)，而且要注意尾區(qū)，因?yàn)楹笳呖赡苁侵гw菌落生長(zhǎng)最好的部位。注意將支原體菌落與氣泡、水及脂質(zhì)滴物或其他雜質(zhì)區(qū)分。呼吸道標(biāo)本、培養(yǎng)物分解葡萄糖，接種后4?20日在SP-4瓊脂平板上產(chǎn)生圓形菌落，可初步報(bào)告肺炎支原體。有條件者可進(jìn)行確診試驗(yàn)，如使用PCR技術(shù)或雙

6、抗體夾心酶聯(lián)免疫捕捉法等進(jìn)行鑒定。2?特異性抗體檢測(cè)感染肺炎支原體后，特異性肺炎支原體IgM抗體可在1周后開始上升，4~5周達(dá)高峰，以后逐漸下降；而特異性肺炎支原體IgG抗體則上升較晩，持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)。檢測(cè)的方法包括冷凝集試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、免疫熒光試驗(yàn)、間接血凝試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、肺炎支原體外膜蛋白抗體測(cè)定。(1)冷凝集試驗(yàn)：冷凝集抗體是IgM抗體，可直接產(chǎn)生人類紅細(xì)胞抗原，在癥狀出現(xiàn)7~10日內(nèi)出現(xiàn)，2~3周后迅速下降。高效價(jià)1：64或以上有特異性，抗體滴度和特異性隨肺炎嚴(yán)重程度增加；冷凝集效價(jià)64也可見于其他疾病，如傳染性單核細(xì)胞增多癥、流行性感冒、風(fēng)疹、腺病毒感染和其他病毒性疾病，

7、因此特異性不夠理想。冷凝集素對(duì)診斷孤立的肺外表現(xiàn)沒有價(jià)值。綜上所述，目前認(rèn)為這一試驗(yàn)并不適合于MP感染的確診。(1)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)：在急性期或恢復(fù)期抗體效價(jià)(主要為IgM)4倍或4倍以上升高，或單一抗體效價(jià)鼻1：32,對(duì)于診斷MP感染敏感性為86%?90%,特異性為87%?94%。如結(jié)合MP特異性IgM抗體測(cè)定，能將診斷的敏感性增加到99%o由于試驗(yàn)用的脂質(zhì)抗原存在于人體組織及某些細(xì)菌，有時(shí)會(huì)交叉反應(yīng)而岀現(xiàn)假陽(yáng)