紅辣椒中色素的分離

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1、實(shí)驗(yàn)二十一紅辣椒中色素的分離[實(shí)驗(yàn)?zāi)康腯學(xué)習(xí)用薄層層析和柱層析方法分離和提取天然產(chǎn)物的原理和實(shí)驗(yàn)方法。[實(shí)驗(yàn)原理]：紅辣椒中含有多種色素，已知的有辣椒紅、辣椒玉紅素和β-胡蘿卜素，它們都屬于類胡蘿卜素類化合物，從結(jié)構(gòu)上說都屬于四萜化合物。其中辣椒紅是以脂肪酸酯的形式存在的，它是辣椒顯深紅色的主要因素。辣椒玉紅素可能也是以脂肪酸酯的形式存在的。本實(shí)驗(yàn)是以二氯甲烷為萃取溶劑，從紅辣椒中只萃取出色素，經(jīng)濃縮后用薄層層析法作初步分析，再用柱層析法分離出紅色素，用紅外光譜鑒定并測(cè)定其紫外吸收。[課前預(yù)習(xí)]簡(jiǎn)單回流、柱色譜、薄層色譜[實(shí)驗(yàn)步驟]

2、1．色素的萃取和濃縮將干的紅辣椒剪碎研細(xì)，稱取1g，置于250mL圓底燒瓶中，加入10mL二氯甲烷和兩三粒沸石，裝上回流冷凝管，水浴加熱回流20分鐘。冷至室溫后抽濾。將所得濾液用水浴加熱蒸餾濃縮至剩約1mL殘液，即為混合色素的濃縮液。2．薄層層析分析用實(shí)驗(yàn)15中所述方法鋪制CMC硅膠薄層板（2.5cm×7.5cm）六塊，晾干并活化后取出一塊，用平口毛細(xì)管汲取前面制得的混合色素濃縮液點(diǎn)樣，用1體積石油醚（30～60℃）與3體積二氯甲烷的混合液作展開劑[1]，展開后記錄各斑點(diǎn)的大小、顏色并計(jì)算其Rf值。已知Rf值最大的三個(gè)斑點(diǎn)是辣椒紅的

3、脂肪酸酯、辣椒玉紅素和β-胡蘿卜素，試根據(jù)它們的結(jié)構(gòu)分別指出這三個(gè)斑點(diǎn)的歸屬。3．柱層析分離選用內(nèi)徑1cm，長(zhǎng)約20cm的層析柱，按照實(shí)驗(yàn)3中記述的方法，用硅膠10g（100～200目）在二氯甲烷中裝柱。柱裝好后用滴管汲取混合色素的濃縮液[2]，仍按照實(shí)驗(yàn)13中的方法將混合加入柱頂。小心沖洗內(nèi)壁后改用體積比為3:8的石油醚（30～60℃）-二氯甲烷混合液淋洗[3]，用不同的接收瓶分別接收先流出柱子的三個(gè)色帶。當(dāng)?shù)谌齻€(gè)色帶完全流出后停止淋洗。4．柱效和色帶的薄層檢測(cè)取三塊硅膠薄層板，劃好起始線，用不同的平口毛細(xì)管點(diǎn)樣[4]。每塊板上點(diǎn)

4、兩個(gè)樣，其中一個(gè)是混合色素濃縮液，另一個(gè)分別是第一、第二、第三色帶。仍用體積比為1:3的石油二氯甲烷混合液作展開劑展開。比較各色帶的Rf值，指出各色帶是何化合物。觀察各色帶點(diǎn)樣展開后是否有新的斑點(diǎn)產(chǎn)生，推估柱層析分離是否達(dá)到了預(yù)期效果。5．紅色素的紅外光譜鑒定和紫外吸收將柱中分得的紅色帶濃縮蒸發(fā)至干，充分干燥后用溴化鉀壓片法作紅外光譜圖，與紅色素純樣品的譜圖相比較，并說明在3100～3600cm-1區(qū)域中為什么沒有吸收峰。用自己分得的紅色素作紫外光譜，確定λmax。本實(shí)驗(yàn)需6小時(shí)。[注意事項(xiàng)]1．本展開劑一般能獲得良好的分離效果。如

5、果樣點(diǎn)分不開或嚴(yán)重拖尾,可酌減點(diǎn)樣量或稍增二氯甲烷比例。2．混合色素濃縮液應(yīng)留出滴作第步使用。3．此淋洗劑一般可獲得良好的分離效果。如色帶分不開，可酌增二氯甲烷的比例。4．不可用同一支毛細(xì)管汲取不同的樣液。[思考題]層析柱中有氣泡會(huì)對(duì)分離帶來什么影響?如何除去氣泡?