幽門螺桿菌外膜36kda 蛋白重組表達與初步鑒定

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1、幽門螺桿菌外膜36kDa蛋白重組表達與初步鑒定幽門螺桿菌外膜36kDa蛋白重組表達、純化及初步鑒定鞠小麗，邵世和，郝渭濱，董蘇榮，崔蕾蕾摘要：［目的］構(gòu)建幽門螺桿菌（H.pylori）NCTC11637菌株36kDa（OMP36）外膜蛋白基因原核表達系統(tǒng)，探索研制H.pylori疫苗的新途徑。［方法］培養(yǎng)和收集H.pyloriNCTC11637菌株，提取基因組DNA，PCR擴增目的基因片斷。將其克隆到T載體并測序，再將目的基因克隆入PET32a（+），構(gòu)建重組表達載體PET32a-OMP36。轉(zhuǎn)化E.coliBL21后IPTG誘導表達，經(jīng)S

2、DS-PAGE鑒定、鎳親和層析純化、Westernblot檢測表達蛋白。［結(jié)果］測序分析表明，插入的基因片斷為987bp，表達的蛋白的相對分子質(zhì)量（Mr）約為36kDa，并顯示具有良好的抗原性。SDS-PAGE檢測表明，表達量占細菌總蛋白的37%，鎳親和層析純化率約92%。Westernblot檢測表達蛋白具有良好的抗原活性。［結(jié)論］成功克隆了外膜蛋白OMP36kDa的編碼基因，其表達產(chǎn)物OMP36有望成為新的Hp疫苗候選分子，為H.pylori疫苗的研制和試劑盒的開發(fā)奠定了良好的基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：幽門螺桿菌；外膜蛋白；基因表達；蛋白純化EXP

3、RESSION，PURIFICATIONANDPRELIMINARYIDENTIFICATIONOF36KDAOUTERMEMBRANEPROTEINFROMHELICOBACTERPYLORIJUXiao-li，SHAOShi-he，HAOWeibin，etal.（DepartmentofMicrobiology，SchoolofMedicalTechnology，JiangsuUniversity，Zhenjiang212003，China）Abstract：［Objective］Toestablishtheexpressionsyst

4、emof36kDaoutermembraneproteinfromstrainNCTC11637ofH.pylori，andtoexplorethenewroutefordevelopvaccineofH.pylori.［Methods］TheNCTC11637strainofH.pyloriwereculturedandcollected，whoseDNAwasextracted，andthegenesegmentswereamplifiedbyPCR.ThegenesegmentswereclonedtoTcarrierandseque

5、nced，thentheobjectivegenewereclonedintoPET32a（+），followedbyconstructingrecombinationofexpressionvector-PET32a-OMP36.AfterinducedwithIPTG，theexpressionofOMP36proteinwasidentifedbySDSPAGE，purifiedwithnickelaffinitychromatograph，anddetectedbyWesternblot.［Results］Thesequencing

6、analysisdemonstratedtheinsertedgenesegmentwas978bp，andrelativemoleculemass（Mr）ofexpressedproductwas56KDa，whichshowedgoodantigenicity.ThedetectionofSDS-PAGEshowedthesolubleexpressionproductaccountedfor37%oftotalbacterialproteinandthethepurityofrecombinantfusionproteinwasabo

7、ut92%.Westernblotanalysisshowedthatrecombinantfusionproteinhadgoodantigenicity.［Conclusion］ThegenecodingforOMP36wasclonedsuccessfully，anditsexpressionproduct，OMP36，mayserveasacandidatevaccineforH.pylori.ThiscouldsettlegoodbasicfordevelopingthevaccineofH.pyloriandkit.Keywor

8、ds：Helicobacterpylori；OMP；Geneexpression；Proteinpurification幽門螺桿菌（H.pyloriHp）是人類重要致病菌，其感染