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1、分類號：R772．2密級：公開單位代碼：10427學(xué)號：2010010398洚卻幺雩碩士學(xué)位論文綠膿桿菌鞭毛蛋白FIgE的重組表達(dá)及初步活性鑒定研究生姓名林丹丹導(dǎo)師姓名學(xué)科、專業(yè)所在學(xué)院申請學(xué)位級別王宜強(qiáng)教授眼科學(xué)曼二ZJ學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院。’一一一?一醫(yī)學(xué)碩士答辯時間2013年5月ExpressionandcharacterizationofrecombinantflagellinFIgEofPseudomonasByLinDanDanUndertheSupervisionofProf．WangYiQiangAThesisSubmittedtotheUniversit
2、yofJinanInPartialFulfillmentoftheRequirementsFortheMasterDegreeofMedicineUniversityofJinanJinan，Shandong，ER．ChinaMay，2013姓名王宜強(qiáng)性別男研究生導(dǎo)師介紹技術(shù)職務(wù)和職稱從事專業(yè)教授眼科學(xué)基礎(chǔ)導(dǎo)師簡介：王宜強(qiáng)男，1966年5月出生，博士，研究員，“泰山學(xué)者”特聘教授‘(眼科學(xué))，博士生導(dǎo)師。中華醫(yī)學(xué)會眼科學(xué)分會免疫學(xué)組委員。自大學(xué)開始從事基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的學(xué)習(xí)和研究，1999年lO月至2004年2月先后在美國愛荷華大學(xué)(UniversityofIowa)醫(yī)學(xué)院從事博士后及助
3、理研究科學(xué)家(AssistantResearchScientist)工作，現(xiàn)主要研究方向?yàn)檠劭粕砗图膊∠嚓P(guān)的免疫學(xué)理論與應(yīng)用基礎(chǔ)。自2004年回國受聘于山東省眼科研究所以來，主持國家自然科學(xué)基金課題四項(xiàng)、973前期研究專項(xiàng)一項(xiàng)、山東省自然科學(xué)杰出青年基金一項(xiàng)：參與其他項(xiàng)目多項(xiàng)。發(fā)表研究論文共計(jì)七十余篇，其中以第一或者通訊作者發(fā)表SCI論文27篇。原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。
4、本人完全意識到本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。論文作者簽名：日期：衛(wèi)!圣：魚：墮關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解濟(jì)南大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借鑒；本人授權(quán)濟(jì)南大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。。酸開口保密(年，解密后應(yīng)遵守此規(guī)定)論文作者簽名：盟導(dǎo)師簽名：塹日期：——濟(jì)南大學(xué)碩士學(xué)位論文目錄摘要??????????????????????????????．IIAbstract????．??????．??．．?????
5、?????????????????????．ItI主要符號表????????????????????????????．V引言???????????????????????????????1第一章材料和方法?????????????????????????．31．1實(shí)驗(yàn)材料????????????????????????????31．2方法???????????????????????????????????????8第二章結(jié)果???????????????????????????172．1FlgE基因的擴(kuò)增以及表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建????????????????172．2重組Fl班的表達(dá)及
6、純化?????????????????????．172．3重組FIgE促進(jìn)HCEC分泌炎性因子????????????????．19第三章討論???????????????????????????20參考文獻(xiàn)?????????????????????????????一22綜述????????????????????????????一．．．．．：???．24綜述參考文獻(xiàn)???????????????????????????一30攻讀學(xué)位期間的研究成果??????????????????????一35致謝??????????????????????????????．．36綠膿桿菌鞭毛蛋白
7、FIgE的重組表達(dá)及初步活性鑒定專業(yè)眼科學(xué)研究生林丹丹導(dǎo)師王宜強(qiáng)教授摘要目的：原核表達(dá)及純化綠膿桿菌鞭毛蛋白FIgE并進(jìn)行初步活性鑒定。方法：分析綠膿桿菌鞭毛蛋白FIgE的基因序列，設(shè)計(jì)帶適當(dāng)酶切位點(diǎn)的引物，用PCR方法擴(kuò)增出FlgE的編碼DNA序列，與大腸桿菌表達(dá)載體pET24a同時經(jīng)NdeI／HindlII雙酶切、純化及連接后構(gòu)建pET24a—FIgE原核表達(dá)質(zhì)粒，挑選重組陽性質(zhì)粒經(jīng)DNA測序確認(rèn)序列正確，轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)條件優(yōu)化，
