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《基因rna干擾載體 對煙草的轉(zhuǎn)化及鑒定》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、編號：畢業(yè)論文（設計）題目：CUC3基因RNA干擾載體對煙草的轉(zhuǎn)化及鑒定院（系）化學與環(huán)境工程學院專業(yè)生物工程學生姓名xxx成績指導教師xxx（職稱）教授指導教師xxx（職稱）研究員2008年6月誠信聲明本人鄭重聲明：所呈交的畢業(yè)設計（論文）是我個人在導師指導下,由我本人獨立完成。有關觀點、方法、數(shù)據(jù)和文獻等的引用已在文中指出,并與參考文獻相對應。據(jù)我查證，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表和撰寫的研究成果，也不包含為獲得其他教育機構的學位或證書而使用過的材料。我承諾，論文中的所有內(nèi)
2、容均真實、可信。如在文中涉及到抄襲或剽竊行為，本人愿承擔由此而造成的一切后果及責任。畢業(yè)論文（設計）作者簽名：簽名日期：年月日摘要采用葉盤法通過已導入了構建好的表達載體的根癌農(nóng)桿菌，對野生型煙草葉片進行轉(zhuǎn)化。煙草葉片在分化培養(yǎng)基MS+0.1mg/LNAA+1.0mg/L6-BA+50mg/LHyg+500mg/LCb上4周后分化出芽；在生根培養(yǎng)基MS+0.2mg/LIBA+250mg/LCb上，1-2周后形成根；葉片β-葡萄糖甘酸酶（GUS）組織化學染色，陽性率為75%；通過PCR檢測潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶（HPT）
3、基因的DNA序列，獲得14個陽性株系。在煙草轉(zhuǎn)化陽性株系中獲得了2種表型：葉片融合和葉片缺失。關鍵詞∶根癌農(nóng)桿菌；GUS組織化學染色;聚合酶鏈式反應(PCR)AbstractAgrobacteriumwithexpressionvectortransformedtheleavesofNicotianatabacum.Regeneratedshootswereformedin4weekswhentheleavesofN.tabacumculturedonshoot-inducingmediumMSmediumsu
4、pplementedwith0.1mg/LNAA,1.0mg/L6-BA,50mg/LHygand500mg/LCb.ShootsrootedontherootinductionmediumMSmediumsupplementedwith0.2mg/LIBAand250mg/LCbin1-2weeks.β-glucuronidase(GUS)histochemicalassayindicatedthattheGUSpositiveratewas75%.PCRanalysisofgeneHygromycinpho
5、sphotransferase(HPT)geneindicatedthattherewere14positivelines.Therewere2distinctphenotypesinthepositivelines:leaffusionandleafincompleteness.Keywords：Agrobacteriumtumefacien;GUSstaining;polymerasechainreaction(PCR)目錄第一章前言11.1煙草概述11.1.1煙草的生物學研究11.1.2煙草的遺傳轉(zhuǎn)化研究
6、進展11.2根癌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化體系21.2.1根癌農(nóng)桿菌介導的分子機制31.2.2用根癌農(nóng)桿菌進行基因轉(zhuǎn)化的植物31.3RNA干擾41.3.1RNA干擾的定義41.3.2siRNA基因沉默原理41.3.3RNA干擾在植物中的應用41.3.4CUC3（Cup-ShapedCotyledon3）基因61.4常用分子生物學實驗方法61.4.1GUS基因檢測——組織化學染色法61.4.2基因組DNA提?。–TAB法）71.4.4PCR技術81.4.4瓊脂糖凝膠電泳81.5立題的依據(jù)及目的101.6本研究的目的及實驗內(nèi)容11
7、第二章材料與方法122.1材料122.1.1植物材料122.1.2菌株122.1.3培養(yǎng)基122.1.4試劑132.1.5實驗儀器142.2方法162.2.1煙草無菌苗的培養(yǎng)162.2.2菌株及培養(yǎng)162.2.3葉盤法浸泡轉(zhuǎn)化及植株再生172.2.4煙草轉(zhuǎn)基因植株鑒定17第三章結果與討論203.1實驗結果203.1.1轉(zhuǎn)化植株的獲得203.1.2GUS組織化學染色法鑒定213.1.3PCR擴增檢測陽性轉(zhuǎn)基因植株223.2轉(zhuǎn)基因植株的表型特征分析223.2.1表型類型Ⅰ——葉片融合223.2.2表型類型Ⅲ——葉片
8、缺失233.3討論243.3.1分化和篩選培養(yǎng)基的選擇243.3.2報告基因的選擇243.3.3表型分析25第四章結論與展望264.1結論264.2展望26致謝27附錄31第一章前言1.1煙草概述煙草在植物分類學上屬于雙子葉植物綱(Dicotyledoneae)、管花目(Tubiflorae)、茄科(Solanacene)，煙屬(Nicotinan)，是許多國家的重要經(jīng)濟作物之一。目前
