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《生物工程專業(yè)畢業(yè)論文cuc3基因rna干擾載體對(duì)煙草的轉(zhuǎn)化及鑒定》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、摘要采用葉盤法通過已導(dǎo)入了構(gòu)建好的表達(dá)載體的根癌農(nóng)桿菌，對(duì)野生型煙草葉片進(jìn)行轉(zhuǎn)化。煙草葉片在分化培養(yǎng)基MS+0.1mg/LNAA+1.0mg/L6-BA+50mg/LHyg+500mg/LCb上4周后分化出芽；在生根培養(yǎng)基MS+0.2mg/LIBA+250mg/LCb上，1-2周后形成根；葉片β-葡萄糖甘酸酶（GUS）組織化學(xué)染色，陽性率為75%；通過PCR檢測(cè)潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶（HPT）基因的DNA序列，獲得14個(gè)陽性株系。在煙草轉(zhuǎn)化陽性株系中獲得了2種表型：葉片融合和葉片缺失。關(guān)鍵詞∶根癌農(nóng)桿菌；GUS組織化學(xué)染色
2、;聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)AbstractAgrobacteriumwithexpressionvectortransformedtheleavesofNicotianatabacum.Regeneratedshootswereformedin4weekswhentheleavesofN.tabacumculturedonshoot-inducingmediumMSmediumsupplementedwith0.1mg/LNAA,1.0mg/L6-BA,50mg/LHygand500mg/LCb.Shootsroot
3、edontherootinductionmediumMSmediumsupplementedwith0.2mg/LIBAand250mg/LCbin1-2weeks.β-glucuronidase(GUS)histochemicalassayindicatedthattheGUSpositiveratewas75%.PCRanalysisofgeneHygromycinphosphotransferase(HPT)geneindicatedthattherewere14positivelines.Therewere2
4、distinctphenotypesinthepositivelines:leaffusionandleafincompleteness.Keywords：Agrobacteriumtumefacien;GUSstaining;polymerasechainreaction(PCR)目錄第一章前言11.1煙草概述11.1.1煙草的生物學(xué)研究11.1.2煙草的遺傳轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展11.2根癌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化體系21.2.1根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的分子機(jī)制31.2.2用根癌農(nóng)桿菌進(jìn)行基因轉(zhuǎn)化的植物31.3RNA干擾41.3.1RNA干擾的
5、定義41.3.2siRNA基因沉默原理41.3.3RNA干擾在植物中的應(yīng)用41.3.4CUC3（Cup-ShapedCotyledon3）基因61.4常用分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)方法61.4.1GUS基因檢測(cè)——組織化學(xué)染色法61.4.2基因組DNA提?。–TAB法）71.4.4PCR技術(shù)81.4.4瓊脂糖凝膠電泳81.5立題的依據(jù)及目的101.6本研究的目的及實(shí)驗(yàn)內(nèi)容11第二章材料與方法122.1材料122.1.1植物材料122.1.2菌株122.1.3培養(yǎng)基122.1.4試劑132.1.5實(shí)驗(yàn)儀器142.2方法162.2.
6、1煙草無菌苗的培養(yǎng)162.2.2菌株及培養(yǎng)162.2.3葉盤法浸泡轉(zhuǎn)化及植株再生172.2.4煙草轉(zhuǎn)基因植株鑒定17第三章結(jié)果與討論203.1實(shí)驗(yàn)結(jié)果203.1.1轉(zhuǎn)化植株的獲得203.1.2GUS組織化學(xué)染色法鑒定213.1.3PCR擴(kuò)增檢測(cè)陽性轉(zhuǎn)基因植株223.2轉(zhuǎn)基因植株的表型特征分析223.2.1表型類型Ⅰ——葉片融合223.2.2表型類型Ⅲ——葉片缺失233.3討論243.3.1分化和篩選培養(yǎng)基的選擇243.3.2報(bào)告基因的選擇243.3.3表型分析25第四章結(jié)論與展望264.1結(jié)論264.2展望26致謝2
7、7附錄31第一章前言1.1煙草概述煙草在植物分類學(xué)上屬于雙子葉植物綱(Dicotyledoneae)、管花目(Tubiflorae)、茄科(Solanacene)，煙屬(Nicotinan)，是許多國(guó)家的重要經(jīng)濟(jì)作物之一。目前已發(fā)現(xiàn)的煙草屬有黃花煙、普通煙、碧煙三個(gè)亞屬，14個(gè)組，共66個(gè)種。煙屬植物大多是草本，少數(shù)是灌木或喬木狀，為一年生或多年生植物。煙屬植物大多數(shù)都能產(chǎn)生一種特有的植物堿－煙堿，含量0.5％－10％。煙堿是煙草中最具有生理作用的物質(zhì)，煙堿含量的多少直接影響煙制品的吃香味和勁頭。煙草在世界上分布很廣
8、，遍布亞洲、南美洲、北美洲、非洲及東歐的廣大地區(qū)。從北緯60℃到南緯50℃，從低于海平面到海拔2500m的高原山地都有煙草分布。我國(guó)大部分地區(qū)都有煙草種植，每年種植而積為100萬hm2左右，煙葉生產(chǎn)約為世界總量的三分之一，是世界上最大的煙草種植國(guó)[1]。1.1.1煙草的生物學(xué)研究一年生草本，高1～2米。莖直立，粗壯，基部木質(zhì)化，上部分枝，被有粘
