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1、慢性乙型肝炎患者血清cccDNA定量檢測(cè)臨床相關(guān)意義研究【摘要】 目的探討慢性乙型肝炎（CHB）患者血清中cccDNA為肝臟損害的臨床標(biāo)志。方法隨機(jī)選取慢性乙型肝炎輕中度、慢性乙型肝炎重度及重型、乙肝病毒攜帶者各20例（所有病例HBVDNA均陽(yáng)性）。使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法分別檢測(cè)入選病例血清中cccDNA值及同時(shí)定量檢測(cè)血清中HBVDNA和ALT、AST、TBIL。結(jié)果三組之間cccDNA拷貝數(shù)分布位置不相同，存在差別（P=0.000<0.01）。60例患者血清中cccDNA值和ALT秩相關(guān)（Rs=0.612，P=0.000<
2、;0.01）；cccDNA值與AST秩相關(guān)（Rs=0.632，P=0.000<0.01）；cccDNA值與TBIL秩相關(guān)（Rs=0.337,P=0.008<0.01，但Rs＜0.4）。結(jié)論患者血清中cccDNA為肝臟損害的標(biāo)志，可作為判斷肝功能損害的又一臨床參數(shù)?！娟P(guān)鍵詞】慢性乙型肝炎；cccDNA；實(shí)時(shí)熒光定量PCR；肝臟損害【Abstract】ObjectiveToverifythecccDNAinchronichepatitisBpatients’seraisansignaloftheliverdamage.MthodsS
3、electedrandomly20slightandmildpatientswithchronichepatitisB,20patientswithseverechronichepatitisand20HBVviralcarriers(allpatientswereHBVDNApositive).ThecccDNAofthe60invesgatedpatientsweredetectedbyselectivereal-timefluorescentquantitativePCR,HBVDNAweredetectedbyroutinePCR,
4、andtheALT、ASTandTBILlweredetectedbyroutinemethod.ResultsTherewassignificantlydifferentinthequantifyofthreegroups’cccDNAinsera(P=0.000<0.01).TheserumcccDNAlevelofchronichepatitisBpatientswascorrelatedwiththelevelofALT（Rs=0.612,P=0.000<0.01）,withAST（Rs=0.632,P=0.000<
5、;0.01）,withTBIL（Rs=0.337,P=0.008<0.01,butRs<0.4）.ConclusionThecccDNAwasansignalofliverdamage,maybeanotherimportantclinicalparameter.【Keywords】chronichepatitisB；cccDNA；liverdamage；real-timefluorescentquantitativePCR肝細(xì)胞核內(nèi)有穩(wěn)定的共價(jià)閉合環(huán)狀DNA（covalentlycircularclosedDNA,cccDNA
6、）存在，為保持慢性感染的基礎(chǔ)。研究發(fā)現(xiàn)部分患者血清中出現(xiàn)cccDNA，可能為肝臟損害釋放至血液中［1］。筆者采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR定量檢測(cè)慢性乙肝（CHB）患者血清中cccDNA，探討患者血清中cccDNA的臨床相關(guān)意義。1對(duì)象與方法1.1研究對(duì)象隨機(jī)選取南昌市第九醫(yī)院住院和門(mén)診CHB患者或病毒攜帶者，所有入選患者血清中HBV4DNA均為陽(yáng)性，共計(jì)60例。CHB輕中度、CHB重度及重型、乙肝病毒攜帶者各20例。診斷符合2000年9月中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲(chóng)學(xué)會(huì)、肝病學(xué)分會(huì)聯(lián)合修訂的病毒性肝炎防治方案，全部患者均經(jīng)血清免疫學(xué)檢查確診，無(wú)合并甲
7、、丙、丁、戊型病毒性肝炎。同時(shí)排除了酒精性肝病、非酒精性脂肪肝和自身免疫性肝病等損害肝臟的原因。1.2標(biāo)本采集與保存患者入院次日測(cè)cccDNA水平。采靜脈血5ml，檢測(cè)肝功能、乙肝病毒標(biāo)志物、HBVDNA定量等，另一份靜脈血5ml離心后儲(chǔ)藏于-70℃冰箱。1.3HBVcccDNA檢測(cè)采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（FQ-PCR）。用德國(guó)羅氏公司LightCycler定量PCR儀檢測(cè)，試劑盒購(gòu)于藍(lán)星生物科技開(kāi)發(fā)有限公司，檢測(cè)值用拷貝/ml。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理用SPSS11.5進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，統(tǒng)計(jì)學(xué)方法為一般性描述統(tǒng)計(jì)，秩和檢驗(yàn)，秩相關(guān)。2結(jié)果2．1
8、CHB患者血清中cccDNA水平三組之間的比較CHB輕中度組在發(fā)病初均能檢測(cè)出cccDNA；CHB重度及重型組17例檢出cccDNA，且拷貝數(shù)高，3例陰性；乙肝病毒攜帶者組只有1
