實(shí)驗(yàn)九 微生物的大小及數(shù)量測定

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1、實(shí)驗(yàn)九微生物的大小及數(shù)量測定摘要通過顯微測微尺測量釀酒酵母的長和寬，對其細(xì)胞體的大小有一個具體的了解；使用血球計(jì)數(shù)板對稀釋n倍的酵母菌懸液進(jìn)行細(xì)胞數(shù)量的測定，從而達(dá)到定量了解微生物的生長繁殖情況。關(guān)鍵詞目鏡測微尺物鏡測微尺血球計(jì)數(shù)板前言微生物細(xì)胞的大小，是微生物重要的形態(tài)特征之一，也是分類鑒定的依據(jù)之一，也讓我們對微生物的實(shí)際大小有了一個感性的認(rèn)識。微生物數(shù)量的測定在微生物生長曲線中運(yùn)用非常重要，我們從微生物的數(shù)量上了解其生長狀況，這也能指導(dǎo)我們的工業(yè)生產(chǎn)。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握測微尺、血球計(jì)數(shù)板的使用方法；2、掌握微生物數(shù)量大小及數(shù)量測定方法。二、實(shí)驗(yàn)原理（一）微生物大小的測定微生

2、物細(xì)胞大小，是微生物的形態(tài)特征之一，也是分類鑒定的依據(jù)之一。由于菌體很小，只能在顯微鏡下測量。用來測量微生物細(xì)胞大小的工具有目鏡測微尺和鏡臺測微尺。鏡臺測微尺（圖1a）是中央部分刻有精確等分線的載玻片。一般將1mm等分為100格，每格長度等于0．01mm（即106μm）。鏡臺測微尺并不直接用來測量細(xì)胞的大小，而是專用于校正目鏡測微尺每格的相對長度。目鏡測微尺（圖1b）是一塊可放在接目鏡內(nèi)的隔板上的圓形小玻片，其中央刻有精確的刻度，有等分50小格或100小格兩種，每5小格間有一長線相隔。由于所用目鏡放大倍數(shù)和物鏡放大倍數(shù)的不同，目鏡測微尺每小格所代表的實(shí)際長度也就不同。因此，目鏡測微

3、尺不能直接用來測量微生物的大小。在使用前必須用鏡臺測微尺進(jìn)行校正，以求得在一定放大倍數(shù)的接目鏡和接物鏡下該目鏡測微尺每小格的相對值，然后才可用來測量微生物的大小。locatedintheTomb,DongShenJiabang,deferthenextdayfocusedontheassassination.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(WuzhensaidinformationisCarpenter),whogotAfewbayonets,duetomissedfatal,whennightcame圖1測微尺及其安裝和校正（

4、二）微生物數(shù)量的測定顯微鏡直接計(jì)數(shù)法是將少量待測樣品的懸浮液置于一種特別的具有確定面積和容積的載玻片上(又稱計(jì)菌器)-顯微鏡下直接計(jì)數(shù)的一種簡便、快速、直觀的方法。目前國內(nèi)外常用的計(jì)菌器有：血球計(jì)數(shù)板、Peteroff-Hauser計(jì)菌器以及Hawksley計(jì)菌器等，它們都可用于酵母、細(xì)菌、霉菌孢子等懸液的計(jì)數(shù)，基本原理相同。后兩種計(jì)菌器由于蓋上蓋玻片后，總?cè)莘e為0.02mm3，而且蓋玻片和載波片之間的距離只有0.02mm，因此可用油浸物鏡對細(xì)菌等較小的細(xì)胞進(jìn)行觀察和計(jì)數(shù)。除了用這些計(jì)菌器外，還有在顯微鏡下直接觀察涂片面積與視野面積之比的估算法，此法一般用于牛乳的細(xì)菌學(xué)檢查。顯微鏡

5、直接計(jì)數(shù)法的優(yōu)點(diǎn)是直觀、快速、操作簡單。但此法的缺點(diǎn)是所測得的結(jié)果通常是死菌體和活菌體的總和。目前已有一些方法可以克服這一缺點(diǎn)，如結(jié)合活菌染色微室培養(yǎng)（短時間）以及加細(xì)胞分裂抑制劑等方法來達(dá)到只計(jì)數(shù)活菌體的目的。本實(shí)驗(yàn)用血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行顯微鏡直接計(jì)數(shù)。用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板在顯微鏡下直接計(jì)數(shù)是一種常用的微生物計(jì)數(shù)方法。該計(jì)數(shù)板是一塊特制的載玻片，其上由四條槽，構(gòu)成三個平臺；中間較寬的平臺又被一短橫槽隔成兩半，每一邊的平臺上各列有一個方格網(wǎng)，每個方格網(wǎng)共分為九個大方格，中間的大方格即為計(jì)數(shù)室。血細(xì)胞計(jì)數(shù)板構(gòu)造如圖2。計(jì)數(shù)室的刻度一般有兩種規(guī)格，一種是一個大方格分成25個中方格，而每個中方格又分

6、成16個小方格；另一種是一個大方格分成16個中方格，而每個中方格又分成25個小方格(圖2)，但無論是哪一種規(guī)格的計(jì)數(shù)板，每一個大方格中的小方格都是400個。每一個大方格邊長為1mm，則每一個大方格的面積為1mm2，蓋上蓋玻片后，蓋玻片與載玻片之間的高度為0.1mm，所以計(jì)數(shù)室的容積為0.1mm3(萬分之一毫升)。計(jì)數(shù)時，通常數(shù)五個中方格的總菌數(shù)，然后求得每個中方格的平均值，locatedintheTomb,DongShenJiabang,deferthenextdayfocusedontheassassination.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorw

7、inemasters(WuzhensaidinformationisCarpenter),whogotAfewbayonets,duetomissedfatal,whennightcame再乘上25或16，就得出一個大方格中的總菌數(shù)，然后再換算成1ml菌液中的總菌數(shù)。25個中方格的計(jì)數(shù)板，設(shè)5個中方格中的總菌數(shù)為A，菌液稀釋倍數(shù)為B，則：1mL菌液中的總菌數(shù)=A/5×25×104×B=50000A·B（個）同理，16個中方格的計(jì)數(shù)板，1mL菌液中的總菌數(shù)=A/5