微生物實(shí)驗(yàn)微生物數(shù)量和大小測(cè)定

《微生物實(shí)驗(yàn)微生物數(shù)量和大小測(cè)定》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。

1、1.微生物大小測(cè)定2.微生物數(shù)量測(cè)定3.大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定實(shí)驗(yàn)五學(xué)習(xí)使用鏡臺(tái)測(cè)微尺和目鏡測(cè)微尺；在顯微鏡下測(cè)定微生物大小。實(shí)驗(yàn)(一)微生物大小的測(cè)定一、目的要求二、實(shí)驗(yàn)原理鏡臺(tái)測(cè)微尺是中央部分刻有精確等分線的載玻片，一般是lmm等分為100格，每格長(zhǎng)0.01mm(即10um)，用于校正目鏡測(cè)微尺每格的相對(duì)長(zhǎng)度。目鏡測(cè)微尺是一塊可放入接目鏡內(nèi)的圓形小玻片，其中央有精確的等分刻度。目鏡測(cè)微尺每小格所代表的實(shí)際長(zhǎng)度不一樣，需將其放在接目鏡中的隔板上，測(cè)量前，必須先用鏡臺(tái)測(cè)微尺進(jìn)行校正。目鏡測(cè)微尺鏡臺(tái)測(cè)微尺1.利用鏡臺(tái)測(cè)微尺測(cè)定目鏡測(cè)微尺的每格絕對(duì)值2.目鏡測(cè)微尺每格長(zhǎng)度（um）＝兩重合線間

2、鏡臺(tái)測(cè)微尺格數(shù)×10/兩重合線間目鏡測(cè)微尺格數(shù)3.利用目鏡測(cè)微尺測(cè)定微生物大小三、實(shí)驗(yàn)器材1、菌種：釀酒酵母（Saccharomycescerevisiae）2、器材：顯微鏡、鏡臺(tái)測(cè)微尺、目鏡測(cè)微尺三、實(shí)驗(yàn)步驟1、目鏡測(cè)微尺的校正鏡臺(tái)測(cè)微尺有刻度的一面朝上，置顯微鏡載物臺(tái)上，先用低倍鏡觀察，將鏡臺(tái)測(cè)微尺有刻度的部分移至視野中央．轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡使目鏡測(cè)微尺的刻度與鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度平行。利用移動(dòng)器移動(dòng)鏡臺(tái)測(cè)微尺，使兩尺在某一區(qū)域內(nèi)兩線完全重合，分別數(shù)出兩重合線之間鏡臺(tái)微尺和目鏡微尺所占的格數(shù)。先10x，后40x，分別計(jì)算10x,40x下目鏡測(cè)微尺的校正值。2、細(xì)胞大小的測(cè)量酵母菌懸液滴在載玻片上，

3、蓋上蓋玻片，置顯微鏡載物臺(tái)上。用目鏡測(cè)微尺測(cè)量細(xì)胞寬和長(zhǎng)。三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.計(jì)算出目鏡測(cè)微尺校正結(jié)果（物10×和40×）2.酵母菌大小測(cè)定酵母菌大小測(cè)定,選擇5-8個(gè)酵母菌，測(cè)定其40×大小范圍。四、思考題p512(2)1、明確血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的原理。2、掌握使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)的方法。實(shí)驗(yàn)(二)微生物數(shù)量的測(cè)定一、目的要求顯微鏡直接計(jì)數(shù)法是將小量待測(cè)樣品的懸浮液置于一種特別的具有確定面積和容積的載玻片上(又稱計(jì)菌器)，于顯微鏡下直接計(jì)數(shù)的一種方法。用于細(xì)胞總數(shù)的測(cè)定顯微鏡直接計(jì)數(shù)法的優(yōu)點(diǎn)是直觀、快速。缺點(diǎn)是所測(cè)得的結(jié)果通常是死菌體和活菌體的總和。目前已有一些方法可以克服這一缺點(diǎn)

4、，如結(jié)合活菌染色，微室培養(yǎng)等方法來(lái)達(dá)到只計(jì)數(shù)活菌體的目的。二、實(shí)驗(yàn)原理血細(xì)胞計(jì)數(shù)板由兩條槽構(gòu)成三個(gè)平臺(tái)；中間較寬的平臺(tái)又被一短橫槽隔成兩半，每一邊的平臺(tái)上各刻有一個(gè)方格網(wǎng)，每個(gè)方格網(wǎng)共分為八個(gè)大方格，中間的大方格即為計(jì)數(shù)室。計(jì)數(shù)室是由一個(gè)大方格分成25個(gè)中方格，而每個(gè)中方格又分成16個(gè)小方格；共計(jì)400個(gè)小方格。計(jì)數(shù)時(shí)，通常數(shù)五個(gè)中方格的總菌數(shù)，然后求得每個(gè)中方格的平均值，以及大方格中的總菌數(shù)，再換算成1ml菌液中的總菌數(shù)。１個(gè)計(jì)數(shù)室＝１×１mm包含５×５個(gè)中方格１個(gè)中方格＝４×４個(gè)小方格三、實(shí)驗(yàn)器材1、菌種：釀酒酵母、大腸桿菌2、器材：顯微鏡、血球計(jì)數(shù)板三、實(shí)驗(yàn)步驟1、在10×和40×

5、下找到計(jì)數(shù)室。2、蓋上蓋玻片將搖勻的釀酒酵母菌懸液由蓋玻片邊緣滴一小滴，讓菌液沿縫隙靠毛細(xì)滲透作用自動(dòng)進(jìn)入計(jì)數(shù)室。3、靜置5min，先用低倍鏡將計(jì)數(shù)室移至視野中央。4、在高倍下(40X)計(jì)數(shù)：對(duì)兩個(gè)計(jì)數(shù)室記數(shù)，方法：每個(gè)計(jì)數(shù)室選5個(gè)中格(4個(gè)角和中央的一個(gè)中格)中的菌體進(jìn)行計(jì)數(shù)，求得每個(gè)中方格的平均值，再乘上25即為大方格中的總菌數(shù)，最后換算成1ml菌液中的總菌數(shù)。對(duì)于分布在刻線上的細(xì)胞，依照“數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右“的原則進(jìn)行計(jì)數(shù)。5、最后的結(jié)果是兩個(gè)計(jì)數(shù)室所記菌數(shù)的平均值三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、統(tǒng)計(jì)每個(gè)計(jì)數(shù)室（五個(gè)中格）的細(xì)胞數(shù)量四、思考題p562(1)記數(shù)中格12345細(xì)胞記數(shù)2、計(jì)算每m

6、l酵母菌懸液的酵母菌數(shù)量。稀釋倍數(shù)為1記數(shù)中格12345細(xì)胞記數(shù)通過(guò)細(xì)菌數(shù)量的測(cè)量了解大腸桿菌的生物特征和規(guī)律，繪制生長(zhǎng)曲線。了解光電比濁計(jì)數(shù)法的原理。學(xué)習(xí)、掌握光電比濁計(jì)數(shù)法的操作方法。實(shí)驗(yàn)(三)大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康纳L(zhǎng)曲線將少量純種單細(xì)胞微生物接種到定量的液體培養(yǎng)基中，定時(shí)取樣測(cè)定細(xì)胞數(shù)量，以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，以菌數(shù)為縱坐標(biāo)作圖，得到一條反映單細(xì)胞微生物在整個(gè)培養(yǎng)期間菌數(shù)變化規(guī)律的曲線。二、實(shí)驗(yàn)原理一個(gè)典型的生長(zhǎng)曲線分為延緩期、對(duì)數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期四個(gè)時(shí)期稀釋平板計(jì)數(shù)法對(duì)樣品稀釋培養(yǎng)，據(jù)形成的菌落數(shù)計(jì)數(shù)。優(yōu)點(diǎn)：活菌計(jì)數(shù)方法，對(duì)設(shè)備要求不高。缺點(diǎn)：操作復(fù)雜。顯微鏡直接計(jì)

7、數(shù)法使用血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下直接計(jì)數(shù)。優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便，計(jì)數(shù)直觀。缺點(diǎn)：計(jì)數(shù)結(jié)果為活細(xì)菌和死菌體的總和。測(cè)定細(xì)胞數(shù)量的常用方法光電比濁法光電比濁法是利用在一定的范圍內(nèi)，微生物細(xì)胞濃度與透光度成反比的原理。當(dāng)細(xì)菌細(xì)胞在溶液中數(shù)量越多，濁度越大，在光電比色計(jì)中測(cè)定時(shí)所吸收的光線越多。優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)便快速，適合于自動(dòng)控制。缺點(diǎn)：測(cè)定結(jié)果受培養(yǎng)液成分影響；某些樣品樣品不適合用此法。菌種培養(yǎng)不同時(shí)段的大腸桿菌。儀器或其他用具分光光度計(jì)，比色皿等。三、