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《實驗五-微生物數(shù)量和大小測定-霉菌的觀察.ppt》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、實驗五微生物大小和數(shù)量測定、霉菌的形態(tài)觀察學(xué)習(xí)使用鏡臺測微尺和目鏡測微尺在顯微鏡下測定微生物大小的方法。實驗(一)微生物大小的測定一、目的要求對于病毒、細菌、放線菌、真菌和原生動物等不同類型的微生物來說，它們的大小存在很大的差異。在同一類型中不同種類的微生物，或同一種類中不同時期的微生物個體，它們的大小也存在很大的差異。二、實驗原理鏡臺測微尺是中央部分刻有精確等分線的載玻片，一般是將lmm等分為100格，每格長0.01mm(即10um)，用于校正目鏡測微尺每格的相對長度。目鏡測微尺是一塊中央有精確的等分刻度的圓形小玻片，置于接目鏡中的隔板上。目鏡測微尺每小格所代
2、表的實際長度不一樣，測量前，必須先用鏡臺測微尺進行校正。目鏡測微尺鏡臺測微尺利用鏡臺測微尺測定目鏡測微尺的每格絕對值目鏡測微尺測定微生物大小三、實驗器材1、菌種：釀酒酵母（Saccharomycescerevisiae）2、器材：顯微鏡、鏡臺測微尺、目鏡測微尺三、實驗步驟1、目鏡測微尺的校正鏡臺測微尺有刻度的一面朝上，置顯微鏡載物臺上，先在低倍鏡下，將鏡臺測微尺有刻度的部分移至視野中央。轉(zhuǎn)動目鏡使目鏡測微尺的刻度與鏡臺測微尺的刻度平行。利用移動器移動鏡臺測微尺，使兩尺在某一區(qū)域內(nèi)兩線完全重合，分別數(shù)出兩重合線之間鏡臺微尺和目鏡微尺所占的格數(shù)。計算10x、40x、
3、油鏡下目鏡測微尺的校正值。目鏡測微尺每格長度（um）＝兩重合線間鏡臺測微尺格數(shù)×10/兩重合線間目鏡測微尺格數(shù)2、細胞大小的測量酵母菌懸液滴在載玻片上，蓋上蓋玻片，置顯微鏡載物臺上。用目鏡測微尺測量細胞寬和長。三、實驗結(jié)果計算出目鏡測微尺校正結(jié)果以及酵母菌大小測定結(jié)果四、思考題p512(2)1、在不改變目鏡和目鏡測微尺，而改用不同放大倍數(shù)的物鏡來測定同一細菌的大小時，其測定結(jié)果是否相同？為什么？1、明確血細胞計數(shù)板計數(shù)的原理。2、掌握使用血細胞計數(shù)板進行微生物計數(shù)的方法。實驗(二)微生物數(shù)量的測定一、目的要求二、實驗原理細胞總數(shù)的測定（包括活的和已喪失活力的細菌
4、）1、比濁法2、染色涂片計數(shù)法3、顯微直接計數(shù)法1、比濁法比濁法的原理是利用細菌細胞在溶液中數(shù)量越多，濁度越大，在光電比色計中測定時所吸收的光線越多。2、染色涂片計數(shù)法取0.01ml的菌懸液放在1cm2的玻片上，讓其干燥，然后固定染色，再置顯微鏡下計數(shù)每一視野中的菌數(shù)，算出視野面積，按下列公式即可求出每ml原菌液中的含菌數(shù)。每ml原菌液中的含菌數(shù)=視野中的平均菌數(shù)×1cm2/視野面積×100×稀釋倍數(shù)3、顯微直接計數(shù)法顯微鏡直接計數(shù)法是將小量待測樣品的懸浮液置于一種特別的具有確定面積和容積的載玻片上(又稱計菌器)，于顯微鏡下直接計數(shù)的一種方法。顯微鏡直接計數(shù)法的
5、優(yōu)點是直觀、快速。缺點是所測得的結(jié)果通常是死菌體和活菌體的總和。目前已有一些方法可以克服這一缺點，如結(jié)合活菌染色，微室培養(yǎng)等方法來達到只計數(shù)活菌體的目的。血細胞計數(shù)板由四條槽構(gòu)成三個平臺；中間較寬的平臺又被一短橫槽隔成兩半，每一邊的平臺上各刻有一個方格網(wǎng)，每個方格網(wǎng)共分為九個大方格，中間的大方格即為計數(shù)室。計數(shù)室是由一個大方格分成25個中方格，而每個中方格又分成16個小方格；共計400個小方格。每一個大方格的面積為1mm2，蓋玻片與計數(shù)區(qū)之間的高度為0.1mm，所以計數(shù)室的容積為0.1mm3。計數(shù)時，通常數(shù)五個中方格的總菌數(shù)，然后求得每個中方格的平均值，以及大方
6、格中的總菌數(shù)，再換算成1ml菌液中的總菌數(shù)。１個計數(shù)室＝１×１mm包含５×５個中方格１個中方格＝４×４個小方格三、實驗器材1、菌種：釀酒酵母2、器材：顯微鏡、血球計數(shù)板三、實驗步驟1、在10×和40×下找到計數(shù)室。2、蓋上蓋玻片將搖勻的釀酒酵母菌（或大腸桿菌）懸液由蓋玻片邊緣滴一小滴，讓菌液沿縫隙靠毛細滲透作用自動進入計數(shù)室。如滴入過多，溢出并流入兩側(cè)槽內(nèi)，使蓋玻片浮起，體積改變，會影響計數(shù)結(jié)果，需用濾紙把多余的溶液吸出，以槽內(nèi)沒有溶液為宜。如滴入溶液過少，經(jīng)多次充液，易產(chǎn)生氣泡，應(yīng)洗凈計數(shù)室，干燥后重做。3、靜止5min（為什么），先用低倍鏡將計數(shù)室移至視野中
7、央。4、在高倍下計數(shù)：每個計數(shù)室選5個中格(4個角和中央的一個中格)中的菌體進行計數(shù)。對于分布在刻線上的細菌，依照“數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右“的原則進行計數(shù)。三、實驗結(jié)果1、統(tǒng)計每個計數(shù)室（五個中格）的細胞數(shù)量四、思考題2、計算酵母菌（以及大腸桿菌）懸液的濃度。稀釋倍數(shù)為11、根據(jù)你的體會，說明用血細胞計數(shù)板計數(shù)的誤差主要來自哪些方面？應(yīng)如何盡量減少誤差、力求準確？記數(shù)中格12345細胞記數(shù)記數(shù)中格12345細胞記數(shù)一、實驗?zāi)康挠^察霉菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)特征學(xué)習(xí)掌握霉菌染色的基本方法實驗（三）霉菌的形態(tài)觀察霉菌：凡在營養(yǎng)基質(zhì)上形成絨毛狀、棉絮狀或蜘蛛網(wǎng)形絲狀菌體的真菌，統(tǒng)
8、稱為霉菌。霉菌包括分類學(xué)
