微生物大小與數(shù)量測(cè)定.ppt

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1、微生物數(shù)量的測(cè)定一、目的要求1．明確血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的原理2．掌握使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)的方法。二、基本原理微生物個(gè)體生長(zhǎng)的時(shí)間較短，很快進(jìn)入分裂繁殖階段，個(gè)體生長(zhǎng)難以測(cè)定。它們的生長(zhǎng)一般以繁殖即群體生長(zhǎng)作為微生物生長(zhǎng)的指標(biāo)。群體生長(zhǎng)表現(xiàn)為細(xì)胞數(shù)目的增加或細(xì)胞物質(zhì)的增加。測(cè)定數(shù)目的方法有顯微鏡直接計(jì)數(shù)法、平板計(jì)數(shù)法、光電比濁法等。顯微鏡直接計(jì)數(shù)法是將小量待測(cè)樣品的懸浮液置于一種特別的具有確定面積和容積的載玻片上，于顯微鏡下直接計(jì)數(shù)的一種簡(jiǎn)便、快速、直觀的方法。三、實(shí)驗(yàn)材料酵母菌液顯微鏡、血球計(jì)數(shù)器3.蓋玻片、毛細(xì)管等血球計(jì)數(shù)板是一塊特制的載玻片，有四條豎槽和一條橫槽

2、。橫槽兩邊的平臺(tái)上各有一個(gè)有九個(gè)大方格的方格網(wǎng)，中間大方格為計(jì)數(shù)室：邊長(zhǎng)為１mm，深為0.1mm，容積為0.1mm3(10-4ml)。計(jì)數(shù)室有兩種規(guī)格：一是分為16個(gè)中方格，每中方格中有25個(gè)小方格；另一種是分為25個(gè)中方格，每中方格有16個(gè)小方格。兩種都共有400個(gè)小方格。4-24-216小格×25大格計(jì)數(shù)室25小格×16大格計(jì)數(shù)室計(jì)數(shù)室的兩種刻度形式四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一.酵母菌數(shù)量的檢測(cè)（顯微鏡直接計(jì)數(shù)法）注意事項(xiàng):取樣時(shí)先要搖勻菌液;加樣時(shí)計(jì)數(shù)室不可有氣泡產(chǎn)生。B.調(diào)節(jié)顯微鏡光線的強(qiáng)弱適當(dāng)。1.取清潔無油的血球計(jì)數(shù)板，在計(jì)數(shù)室上面加蓋玻片。2.取酵母菌液，搖勻，用滴管由蓋玻

3、片邊緣滴一小滴，使菌液自行滲入，計(jì)數(shù)室內(nèi)不得有氣泡。3.靜止5min后，用低倍鏡觀察并將計(jì)數(shù)室移至視野中央。4.在高倍鏡下計(jì)數(shù)：隨機(jī)計(jì)數(shù)五個(gè)中格的平均值，然后求得每個(gè)中格的平均值。乘上16（或25）就得出一大格中的總菌數(shù)，最后再換算到每mL菌液中的含菌數(shù)。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容5.計(jì)算方法：6.注意事項(xiàng)：壓在方格線上的菌體，以壓在底線和右側(cè)線上的菌體計(jì)入本格內(nèi)；遇到有芽體的酵母時(shí)，若芽體和母體同等大，就按單個(gè)酵母計(jì)數(shù)。7.計(jì)數(shù)完畢后，血球計(jì)數(shù)板要立即清洗干凈，并用吸水紙吸干，最后用擦鏡紙擦干凈，并放回盒內(nèi)。（X1+X2+X3+X4+X5）5X25（或16）X10X1000x稀釋倍數(shù)酵

4、母菌細(xì)胞數(shù)/mL=四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告1、結(jié)果記錄：將計(jì)數(shù)結(jié)果記錄下表。A表示五個(gè)中方格中的總菌數(shù)。B稀釋倍數(shù)為102。注:1mL菌液總數(shù)=A/5×25×104×B=5×107×A細(xì)菌大小的測(cè)定一、目的要求學(xué)習(xí)測(cè)微尺的使用和計(jì)算方法利用測(cè)微尺測(cè)量微生物的大小二、基本原理微生物個(gè)體生長(zhǎng)的時(shí)間較短，很快進(jìn)入分裂繁殖階段，個(gè)體生長(zhǎng)難以測(cè)定。它們的生長(zhǎng)一般以繁殖即群體生長(zhǎng)作為微生物生長(zhǎng)的指標(biāo)。群體生長(zhǎng)表現(xiàn)為細(xì)胞數(shù)目的增加或細(xì)胞物質(zhì)的增加。測(cè)定數(shù)目的方法有顯微鏡直接計(jì)數(shù)法、平板計(jì)數(shù)法、光電比濁法等。微生物細(xì)胞的大小是微生物基本的形態(tài)特征，也是分類鑒定的依據(jù)之一。微生物大小的測(cè)定，

5、需要在顯微鏡下，借助于特殊的測(cè)量工具即測(cè)微尺，包括目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺。三、實(shí)驗(yàn)材料酵母菌液顯微鏡、目鏡測(cè)微尺、鏡臺(tái)測(cè)微尺3.載玻片、蓋玻片、接種環(huán)、膠頭吸管等四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容注意事項(xiàng)：觀察時(shí)光線不宜過強(qiáng),否則難以找到鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度;換高倍鏡和油鏡校正時(shí),務(wù)必十分小心,防止接物鏡壓壞鏡臺(tái)測(cè)微尺和損壞鏡頭。1.測(cè)微尺的校正（標(biāo)定）：兩重合線間鏡臺(tái)測(cè)微尺格數(shù)Ⅹ10目鏡測(cè)微尺每格長(zhǎng)度(μm)=兩重合線間目鏡測(cè)微尺格數(shù)2．酵母菌大小的測(cè)定：利用制好的血球器浸片，用高倍鏡測(cè)出寬和長(zhǎng)各占目鏡測(cè)微尺的格數(shù)，再將測(cè)到的格數(shù)乘以目鏡測(cè)微尺（用高倍鏡時(shí)標(biāo)定的）每格所代表的長(zhǎng)度，即為酵母菌的實(shí)際

6、大小。五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告（1）將目鏡測(cè)微尺校正結(jié)果填入下表:接目鏡放大倍數(shù)：-10×-五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告(2)將酵母菌大小測(cè)定結(jié)果填入下表：五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告2.思考題：在不改變目鏡和目鏡測(cè)微尺，而改用不同放大倍數(shù)的物鏡來測(cè)定同一細(xì)菌的大小時(shí)，其測(cè)定結(jié)果是否相同？為什么？為什么更換不同放大倍率目鏡和物鏡時(shí)，必須用鏡臺(tái)測(cè)微尺重新對(duì)目鏡測(cè)微尺進(jìn)行校正？