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《醫(yī)藥學(xué)臨床醫(yī)學(xué)畢業(yè)論文 酶聯(lián)免疫吸附法檢測丙型肝炎病毒抗體出現(xiàn)假陽性的原因分析和解決方法》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、湖南師范大學(xué)本科畢業(yè)論文考籍號：XXXXXXXXX姓名：XXX專業(yè)：醫(yī)藥學(xué)臨床醫(yī)學(xué)論文題目：酶聯(lián)免疫吸附法檢測丙型肝炎病毒抗體出現(xiàn)假陽性的原因分析和解決方法指導(dǎo)老師：XXX二〇一一年十二月十日［摘要］目的探討丙型肝炎病毒（HCV）抗體檢測酶聯(lián)免疫吸附法出現(xiàn)假陽性的原因分析和解決方法。方法對酶聯(lián)免疫吸附法測定HCV抗體弱陽性的16份標(biāo)本用核酸擴(kuò)增熒光基因分析法檢測HVC-RNA進(jìn)行確證試驗，確定其假陽性率，尋找引起假陽性的原因及其解決方法。結(jié)果酶聯(lián)免疫吸附法測HCV抗體陽性的標(biāo)本再用核酸擴(kuò)增熒光基因分析法檢測HCV-RNA，有75％
2、的陽性率，其中假陽性的有25％。結(jié)論酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測HCV抗體由于有許多影響因素可導(dǎo)致結(jié)果假陽性，對懷疑假陽性的標(biāo)本應(yīng)檢測丙型肝炎病毒RNA來確診?！ 。坳P(guān)鍵詞］酶聯(lián)免疫吸附法；核酸擴(kuò)增熒光基因分析法；丙型肝炎病毒抗體；假陽性 目前臨床上廣泛應(yīng)用的丙型肝炎病毒（HCV）感染診斷方法主要是檢測患者血清HCV抗體，酶聯(lián)免疫吸附法是臨床進(jìn)行HCV診斷的主要方法之一［1］，因其靈敏度高、特異性強(qiáng)，在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，但試驗中有許多因素如不注意可能導(dǎo)致假陽性的結(jié)果?，F(xiàn)對我院2004年5月～2006年4月檢測的抗HCV抗體結(jié)果中1
3、6份弱陽性標(biāo)本進(jìn)行如下分析?！ ?材料與方法 1.1標(biāo)本來源2004年5月～2006年4月我院門診和住院患者檢測HCV抗體的標(biāo)本?！ ?.2儀器與試劑儀器：DA-7600核酸擴(kuò)增實時熒光基因分析儀為達(dá)安基因股份有限公司產(chǎn)品；BIONADMODEL1575自動洗板機(jī)；普朗DNM-9602酶標(biāo)儀。試劑：HCV-RNA測定試劑為達(dá)安基因股份有限公司產(chǎn)品；HCV抗體酶聯(lián)免疫試劑盒?！ ?.3方法對酶聯(lián)免疫吸附法檢測HCV抗體弱陽性的標(biāo)本中3S/CO1的16份標(biāo)本，再用核酸擴(kuò)增熒光基因分析法檢測HCV-RNA?！ ?結(jié)果 兩種檢測方法結(jié)
4、果見表1?！ ”?兩種檢測方法結(jié)果比較 略 由表1可知，酶聯(lián)免疫吸附法HCV抗體陽性的標(biāo)本再用核酸擴(kuò)增熒光基因分析法檢測HCV-RNA，有75％的陽性率，其中假陽性的有25％。導(dǎo)致酶聯(lián)免疫吸附法假陽性的原因可能有如下幾點(diǎn)?！ ?.1標(biāo)本的處理標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣，血清與纖維蛋白原分離不完全，使纖維蛋白原吸附于孔壁，難以清洗徹底；標(biāo)本重度溶血；相鄰的標(biāo)本出現(xiàn)陽性污染。 2.2加樣加樣時間過長造成加樣后放入恒溫箱前等待時間過長；標(biāo)本加完后加酶試劑時濺出孔外；加樣后孔壁上貼有微小血塊。 2.3溫育溫育時未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀
5、釋液蒸發(fā)吸附于孔壁，難以徹底清洗；溫育時間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗徹底?！ ?.4洗板（1）手工洗板時，孔與孔之間液體交叉。（2）自動洗板機(jī)洗板時，洗板針堵塞，抽吸不完全；洗液量不足，導(dǎo)致洗板不徹底；洗板次數(shù)少?！ ?.5洗液混合使用不同廠家出品的洗液?！ ?.6讀板讀板時板底不清潔。 2.7顯色使用同一廠家生產(chǎn)的不同產(chǎn)品的顯色劑；加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。16份陽性標(biāo)本中有4份是15歲以下的男性兒童，且不具備明顯危險因素，可能是血清中存在某種干擾因素，有待于今后找出原因。 3解決方法 ?。?
6、）標(biāo)本若為凝固血，最好將標(biāo)本先自然存放1h，再用3000r/min離心15min；標(biāo)本若為抗凝血，采血后必須立即顛倒采血管5次以上，放置一段時間后，3000r/min離心15min。（2）加樣后加貼封片及時放入恒溫箱。（3）加酶試劑時不要滴出孔外，如有用吸水紙輕拭吸干。（4）嚴(yán)格按說明步驟控制操作時間。但適當(dāng)延長反應(yīng)時間，可提高陽性標(biāo)本特別是弱陽性的檢出率，對陰性標(biāo)本無明顯影響［2］。（5）保證洗板針暢通，洗液注滿各孔，洗完后在吸水紙上輕拍吸干。（6）顯色劑不要混用；不要用過期的顯色劑；加顯色劑時不外流。（7）不同批號的試劑不要混
7、用，試劑在用前應(yīng)在室溫中放置30min。（8）每天應(yīng)做質(zhì)控、陽性對照、陰性對照。 4討論 酶聯(lián)免疫吸附方法其原理為抗原抗體特異性結(jié)合和抗原抗體的酶標(biāo)記，以酶催化底物顯色來判斷結(jié)果。影響酶聯(lián)免疫實驗的因素較多，諸如標(biāo)本的采集保存、試劑的準(zhǔn)備、加樣的技術(shù)、孵育溫度的控制、顯色反應(yīng)時間的控制、洗滌反應(yīng)板的方式等發(fā)生的一系列問題均有可能對試驗結(jié)果產(chǎn)生很大的影響，只有避免了這些因素，才能保證試驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。在工作中應(yīng)嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，認(rèn)真對待每一份標(biāo)本，對可疑的標(biāo)本要進(jìn)行復(fù)查，不能確診的要做HCV-RNA測定，以確保檢
8、驗質(zhì)量，杜絕假陽性結(jié)果。 ?。蹍⒖嘉墨I(xiàn)］ 1張卓然，倪語星.臨床微生物學(xué)和微生物檢驗，第3版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2004，385. 2于洋，周誠，祁自柏，等.丙型肝炎病毒抗體診斷試劑的質(zhì)量檢測.中國生物制品雜志，2003，16（2）：108
