酶聯(lián)免疫吸附法檢測丙型肝炎病毒抗體出現(xiàn)假陽性的原因分析和解決方法_1

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1、從本學科出發(fā)，應著重選對國民經(jīng)濟具有一定實用價值和理論意義的課題。課題具有先進性，便于研究生提出新見解，特別是博士生必須有創(chuàng)新性的成果酶聯(lián)免疫吸附法檢測丙型肝炎病毒抗體出現(xiàn)假陽性的原因分析和解決方法［摘要］目的探討丙型肝炎病毒抗體檢測酶聯(lián)免疫吸附法出現(xiàn)假陽性的原因分析和解決方法。方法對酶聯(lián)免疫吸附法測定HCV抗體弱陽性的16份標本用核酸擴增熒光基因分析法檢測HVC-RNA進行確證試驗，確定其假陽性率，尋找引起假陽性的原因及其解決方法。結果酶聯(lián)免疫吸附法測HCV抗體陽性的標本再用核酸擴增熒光基因分析法檢測HCV-RNA，有75％的陽性率，其中假陽性的有25％。結論酶聯(lián)免疫吸附

2、試驗檢測HCV抗體由于有許多影響因素可導致結果假陽性，對懷疑假陽性的標本應檢測丙型肝炎病毒RNA來確診。［關鍵詞］酶聯(lián)免疫吸附法；核酸擴增熒光基因分析法；丙型肝炎病毒抗體；假陽性　　目前臨床上廣泛應用的丙型肝炎病毒感染診斷方法主要是檢測患者血清HCV抗體，酶聯(lián)免疫吸附法是臨床進行HCV診斷的主要方法之一［1］，因其靈敏度高、特異性強，在臨床上得到了廣泛的應用，但試驗中有許多因素如不注意可能導致假陽性的結果?，F(xiàn)對我院XX年5月～XX年4月檢測的抗HCV抗體結果中16份弱陽性標本進行如下分析?！?材料與方法課題份量和難易程度要恰當，博士生能在二年內作出結果，碩士生能在一年內作出

3、結果，特別是對實驗條件等要有恰當?shù)墓烙?。從本學科出發(fā)，應著重選對國民經(jīng)濟具有一定實用價值和理論意義的課題。課題具有先進性，便于研究生提出新見解，特別是博士生必須有創(chuàng)新性的成果標本來源004年5月～XX年4月我院門診和住院患者檢測HCV抗體的標本。儀器與試劑儀器：DA-7600核酸擴增實時熒光基因分析儀為達安基因股份有限公司產(chǎn)品；BIONADMODEL1575自動洗板機；普朗DNM-9602酶標儀。試劑：HCV-RNA測定試劑為達安基因股份有限公司產(chǎn)品；HCV抗體酶聯(lián)免疫試劑盒。方法對酶聯(lián)免疫吸附法檢測HCV抗體弱陽性的標本中3>S/CO>1的16份標本，再用核酸擴增熒光基因

4、分析法檢測HCV-RNA?！?結果兩種檢測方法結果見表1。表1兩種檢測方法結果比較　略　　由表1可知，酶聯(lián)免疫吸附法HCV抗體陽性的標本再用核酸擴增熒光基因分析法檢測HCV-RNA，有75％的陽性率，其中假陽性的有25％。導致酶聯(lián)免疫吸附法假陽性的原因可能有如下幾點。.1標本的處理標本分離不好即進行加樣，血清與纖維蛋白原分離不完全，使纖維蛋白原吸附于孔壁，難以清洗徹底；標本重度溶血；相鄰的標本出現(xiàn)陽性污染。.2加樣課題份量和難易程度要恰當，博士生能在二年內作出結果，碩士生能在一年內作出結果，特別是對實驗條件等要有恰當?shù)墓烙?。從本學科出發(fā)，應著重選對國民經(jīng)濟具有一定實用價值和

5、理論意義的課題。課題具有先進性，便于研究生提出新見解，特別是博士生必須有創(chuàng)新性的成果加樣時間過長造成加樣后放入恒溫箱前等待時間過長；標本加完后加酶試劑時濺出孔外；加樣后孔壁上貼有微小血塊。.3溫育溫育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發(fā)吸附于孔壁，難以徹底清洗；溫育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗徹底。.4洗板手工洗板時，孔與孔之間液體交叉。自動洗板機洗板時，洗板針堵塞，抽吸不完全；洗液量不足，導致洗板不徹底；洗板次數(shù)少。.5洗液混合使用不同廠家出品的洗液。.6讀板讀板時板底不清潔。.7顯色使用同一廠家生產(chǎn)的不同產(chǎn)品的顯色劑；加顯色劑時濺出孔外造成液

6、體回流。16份陽性標本中有4份是15歲以下的男性兒童，且不具備明顯危險因素，可能是血清中存在某種干擾因素，有待于今后找出原因。解決方法標本若為凝固血，最好將標本先自然存放1h，再用3000r/min離心1min；標本若為抗凝血，采血后必須立即顛倒采血管5次以上，放置一段時間后，3000r/min離心1min。加樣后加貼封片及時放入恒溫箱。加酶試劑時不要滴出孔外，如有用吸水紙輕拭吸干。嚴格按說明步驟控制操作時間。但適當延長反應時間，可提高陽性標本特別是弱陽性的檢出率，對陰性標本無明顯影響課題份量和難易程度要恰當，博士生能在二年內作出結果，碩士生能在一年內作出結果，特別是對實驗

7、條件等要有恰當?shù)墓烙嫛谋緦W科出發(fā)，應著重選對國民經(jīng)濟具有一定實用價值和理論意義的課題。課題具有先進性，便于研究生提出新見解，特別是博士生必須有創(chuàng)新性的成果［2］。保證洗板針暢通，洗液注滿各孔，洗完后在吸水紙上輕拍吸干。顯色劑不要混用；不要用過期的顯色劑；加顯色劑時不外流。不同批號的試劑不要混用，試劑在用前應在室溫中放置30min。每天應做質控、陽性對照、陰性對照。討論酶聯(lián)免疫吸附方法其原理為抗原抗體特異性結合和抗原抗體的酶標記，以酶催化底物顯色來判斷結果。影響酶聯(lián)免疫實驗的因素較多，諸如標本的采集保存、試劑的準備