奈瑟菌的分離和鑒定ppt課件

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1、奈瑟菌的分離和鑒定1—、腦膜炎奈瑟菌腦膜炎奈瑟菌(Neisseria.meningitidis)簡(jiǎn)稱(chēng)腦膜炎球菌，是引起流行性腦脊髓炎（簡(jiǎn)稱(chēng)“流腦”）的病原菌。多發(fā)年齡在5~29歲。對(duì)本菌的鑒定是確定診斷的重要依據(jù)，同時(shí)給臨床治療提供參考價(jià)值。2人類(lèi)是腦膜炎球菌的唯一宿主。流行性腦脊髓炎病人和帶菌者是本病的傳染源。本病經(jīng)飛沫傳染，潛伏期1~4d。細(xì)菌首先侵害鼻咽腔，引起上呼吸道感染或局部炎癥。當(dāng)少量細(xì)菌侵入血流時(shí)，可引起菌血癥突發(fā)惡寒、發(fā)熱、惡心、嘔吐等，并有出血或紅斑性皮疹及脾腫大。當(dāng)大量細(xì)菌侵入血流時(shí)，由血液或淋巴到達(dá)腦脊髓膜則發(fā)生腦脊髓炎的癥狀和體癥。在

2、我國(guó)以A群流行為主。31.生物學(xué)性狀（1）形態(tài)與染色腦膜炎球菌為革蘭陰性雙球菌，菌體呈腎形或豆形，成雙排列凹面（短軸）相對(duì)。由病人體內(nèi)新分離的菌株有多糖莢膜。（2）培養(yǎng)特點(diǎn)本菌為專(zhuān)性需氧菌，營(yíng)養(yǎng)要求高，5~8%CO2可促進(jìn)生長(zhǎng)，其最適生長(zhǎng)溫度為36~37℃，最適pH值為7.4~7.6。在巧克力平板上經(jīng)18~24h培養(yǎng)，形成圓形、光滑、透明、濕潤(rùn)、邊緣整齊菌落。直徑2~3mm，在血平板上不溶血。培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，由于細(xì)菌自溶酶的作用，菌落可變成酪樣或膠樣。（3）生化反應(yīng)特點(diǎn)腦膜炎球菌可分解葡萄糖、麥芽糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。不分解蛋白質(zhì)，不產(chǎn)生靛基質(zhì)，不產(chǎn)生硫化氫，不分解

3、尿素，硝酸鹽還原試驗(yàn)陰性，氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性。42.標(biāo)本采集：根據(jù)病期不同，采集的標(biāo)本也有所不同。菌血癥期病人可采取血液；出現(xiàn)出血點(diǎn)或瘀斑者，可挑取瘀斑滲出液；如出現(xiàn)腦脊髓膜刺激癥狀者，必要時(shí)可抽取腦脊液；上呼吸道感染期的疑似病人和帶菌者，可取鼻咽腔分泌物進(jìn)行檢查。因該菌易自溶，故應(yīng)立即送檢，最好在床邊接種。53.檢驗(yàn)方法：（1）直接檢查法：1）腦脊液以無(wú)菌方法獲得腦脊液標(biāo)本后，經(jīng)3000r/min離心30min，取沉淀物，首先接種培養(yǎng)，然后再涂片染色檢查。通常制兩張涂片，一張作革蘭染色，一張作美藍(lán)染色進(jìn)行鏡檢。若腦脊液較清應(yīng)先增菌，即在腦脊液中加入少量葡萄糖肉

4、湯培養(yǎng)液，經(jīng)37℃4~6h增菌培養(yǎng)后，再行涂片染色鏡檢，可提高陽(yáng)性檢出率。一般情況下，患病早期的腦脊液中腦膜炎球菌數(shù)量較少，且大多數(shù)在細(xì)胞外；在疾病后期菌量增大，大多數(shù)在細(xì)胞內(nèi)。2）瘀斑（出血點(diǎn)）選擇細(xì)小的色澤鮮紅，境界明顯的瘀點(diǎn)，或無(wú)瘀點(diǎn)時(shí)用充血皮膚，經(jīng)消毒干燥后刺入0.5cm，用清潔玻片采血三滴，涂成血膜片，自然干燥。用美藍(lán)或革蘭染色鏡檢。第一滴血含菌量比第二、三滴血高數(shù)倍，故不能按常規(guī)采血棄去第一、二滴血。67（2）培養(yǎng)檢查法1）腦脊液取腦脊液離心沉淀物，立刻接種巧克力平板，37℃，5~8%CO2環(huán)境培養(yǎng)18~24h。如腦脊液混濁可直接種入培養(yǎng)基。2）

5、瘀斑滲出物滲出物直接涂于巧克力平板上，37℃，5~8%CO2環(huán)境培養(yǎng)18~24h。3）鼻咽腔分泌物將綿拭標(biāo)本立即涂于，P.V(PolymyxinB.Vancomycin)卵黃瓊脂或P.V巧克力平板一端，再用接種環(huán)劃線分離，進(jìn)行培養(yǎng)觀察。4）血液抽取靜脈血5~8ml，立刻接種注入血培養(yǎng)瓶，按血液細(xì)菌培養(yǎng)常規(guī)操作。8910111213（3）生化反應(yīng)取純培養(yǎng)物，如其形態(tài)、菌落特征典型，氧化酶陽(yáng)性，可按表1進(jìn)行鑒定。14（4）凝集試驗(yàn)包括血清凝集試驗(yàn)、SPA協(xié)同凝集試驗(yàn)、反向乳膠凝集試驗(yàn)等方法。15（5）莢膜腫脹試驗(yàn)取一接種環(huán)菌掖或腦脊液，于玻片上，再加一環(huán)抗血清及

6、二環(huán)呂氏美藍(lán)液混合，加上蓋玻片，20min，用油鏡觀察莢膜是否腫脹，同時(shí)用鹽水作對(duì)照。此試驗(yàn)僅適用于A群和C群菌株。16二、淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌（N.gonorrhoeae）簡(jiǎn)稱(chēng)淋球菌，它是淋病的病原菌。主要通過(guò)不潔性交引起泌尿生殖系統(tǒng)化膿性炎癥，也可通過(guò)污染器械、帶菌衣物、用具發(fā)生間接污染。也有肛門(mén)及咽部的淋球菌感染病例。新生兒經(jīng)過(guò)產(chǎn)道時(shí)，可被感染而患淋病性眼結(jié)膜炎。171.生物學(xué)性狀：（1）形態(tài)與染色淋球菌的形態(tài)與腦膜炎球菌很相似，菌體呈球形、腎形或豆形，成對(duì)排列，兩球菌接觸面平坦，形似一對(duì)黃豆。革蘭染色陰性，無(wú)芽孢、無(wú)鞭毛、有莢膜。在急性淋病患者尿道膿

7、汁標(biāo)本中可見(jiàn)細(xì)菌被吞噬于中性粒細(xì)胞內(nèi)；慢性淋病時(shí)多在細(xì)胞外。1819（2）培養(yǎng)特點(diǎn)本菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求高，需用巧克力平板，或含萬(wàn)古霉素、多粘菌素及制霉菌素的Thayer-Martin培養(yǎng)基（GC瓊脂加生長(zhǎng)添加劑）才能生長(zhǎng)。初次分離需供給5~8%CO2，最適生長(zhǎng)溫度為36~37℃，最適pH值為7.5。經(jīng)48h培養(yǎng)，形成圓形、不透明、灰白色凸起，細(xì)小顆粒狀菌落。直徑0.6~1.0mm，進(jìn)一步培養(yǎng)，菌落可呈粘液樣。202122（3）生化反應(yīng)特點(diǎn)淋球菌只分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不產(chǎn)生靛基質(zhì)，不產(chǎn)生硫化氫，硝酸鹽還原試驗(yàn)陰性，氧化酶及觸酶試驗(yàn)均陽(yáng)性。232.標(biāo)本采集：（1）

8、男性尿道炎患者，先以無(wú)菌生理鹽水清洗尿道口，采集尿道