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《實(shí)驗(yàn)六tppa檢測梅毒螺旋體抗體和trust檢測反應(yīng)素》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、實(shí)驗(yàn)六TPPA檢測梅毒螺旋體抗體和TRUST檢測反應(yīng)素醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系臨床微生物免疫檢驗(yàn)教研室何應(yīng)中一、目的及要求掌握：凝集法的基本原理和TPPA檢測梅毒螺旋體抗體的實(shí)驗(yàn)原理。熟悉：TRUST檢測反應(yīng)素的原理，TPPA的操作方法和結(jié)果判定。了解：TRUST的操作及結(jié)果判斷，TPPA和TRUST的注意事項(xiàng)及臨床意義。二、基本概念1.直接凝集反應(yīng)：細(xì)菌、螺旋體、紅細(xì)胞等顆粒抗原，在適當(dāng)電解質(zhì)參與下可直接與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。2.間接凝集反應(yīng)：先將可溶性抗原(或抗體)吸附于適當(dāng)大小的顆粒性載體表面，然后與相應(yīng)抗體(或抗原)反應(yīng)，在適當(dāng)電解
2、質(zhì)參與下，出現(xiàn)特異性凝集現(xiàn)象。基本概念凝集反應(yīng)是一種定性檢測方法，根據(jù)凝集現(xiàn)象出現(xiàn)與否判定結(jié)果是否陽性或陰性，但也可做半定量檢測，即將待測樣本作一系列倍比稀釋后進(jìn)行反應(yīng)，以出現(xiàn)凝集反應(yīng)的最高稀釋度為效價(jià)?；靖拍蠲范韭菪w(treponemapallidum,TP)引起全身性慢性傳染病--梅毒，主要通過性交傳染。TP進(jìn)入人體后，可產(chǎn)生兩種抗體，一種是非特異性抗心擬脂抗體(又稱反應(yīng)素)，可用牛心擬脂檢測，稱非梅毒螺旋體抗原血清反應(yīng)；另一種是抗梅毒螺旋體抗體，可用梅毒螺旋體檢測出來，稱梅毒螺旋體抗原血清反應(yīng)。本次實(shí)驗(yàn)以梅毒螺旋體被動(dòng)顆粒凝集試驗(yàn)(
3、treponemapallidumpassiveparticleagglutinationtest，TPPA)檢測梅毒螺旋體抗體和梅毒甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)(syphilistoluidinereduntreatedserumtest，TRUST)檢測血清中的反應(yīng)素。三、梅毒螺旋體被動(dòng)顆粒凝集試驗(yàn)(treponemapallidumpassiveparticleagglutinationtest，TPPA)檢測梅毒螺旋體抗體（一）實(shí)驗(yàn)原理TPPA是將梅毒TreponemaPallidum(Nicho1s株)的精制菌體成分包被在人工載體明膠粒子
4、上。這種致敏粒子和樣品中的梅毒螺旋體(TP)抗體進(jìn)行反應(yīng)發(fā)生凝集，產(chǎn)生粒子凝集反應(yīng)(ParticleAgglutinationTest；PA法)，由此可以檢測出血清或血漿中的梅毒螺旋體(TP)抗體，并且可用來測定抗體效價(jià)。（二）試劑和器材1.梅毒螺旋體抗體診斷試劑(凝集法)包括溶解液、血清稀釋液、致敏明膠粒子(凍干粉)、未致敏粒子(凍干粉)、陽性對照血清等，有商品供應(yīng)。2.待測血清臨床篩選獲得。3.器材U型微量反應(yīng)板、可調(diào)移液器(10～100μl,100～1000μl)、加樣吸嘴、刻度滴管、25μl微量滴管、平板混合器、判定用觀察板等。（三）
5、操作方法1．1％致敏粒子和1％未致敏粒子的配制：分別加入一定量的溶解液溶解混勻即可。請?jiān)谑褂们?0分鐘于室溫(15～30℃)下進(jìn)行配制。2．用移液器加入血清稀釋液100μl于U型微量反應(yīng)板第1孔中，從第2孔至第6孔各加入25μl。操作方法3．用移液器取樣本25μl至第1孔中混勻，然后用移液器從第1孔吸取25μl于第2孔中混勻，再從第2孔中吸取25μl于第3孔中……依次類推，以2N的方式從第1孔稀釋至第6孔。4．用試劑盒中提供的滴管或移液器在第3孔中滴入1滴(25μl)未致敏粒子，從第4孔至第6孔各加入1滴(25μl)致敏粒子。操作方法5．用平
6、板混合器(或用手輕輕撞擊敲動(dòng))以不會(huì)導(dǎo)致微量反應(yīng)板孔內(nèi)容物濺出的強(qiáng)度混合30秒鐘，加蓋后于室溫(15～30℃)下水平靜置2小時(shí)后或次日，在觀察鏡上記錄并觀察其反應(yīng)圖像，或者利用免疫稀釋判定裝置進(jìn)行測定。見表3。操作方法表3凝集法操作步驟WellNo.123456血清稀釋液(ul)1002525252525待測血清(ul)25252525252525未致敏粒子(ul)25致敏粒子(ul)252525最終稀釋倍數(shù)1:401:801:1601:320混勻，加蓋后置室溫(15～30℃)水平靜置2小時(shí)或過夜，觀察反應(yīng)判定結(jié)果（四）結(jié)果判斷1.反應(yīng)圖像判
7、定在判定用觀測板上靜置微量反應(yīng)板，觀察粒子的反應(yīng)圖像。將反應(yīng)圖像與介質(zhì)對照圖像進(jìn)行比較，并參照表4進(jìn)行判斷。表4凝集法反應(yīng)圖像判定反應(yīng)圖像判定粒子成紐扣狀聚集,呈現(xiàn)外周邊緣均勻且平滑的圓形(－)粒子形成小環(huán)狀,呈現(xiàn)出外周邊緣均勻且平滑的圓形(±)粒子環(huán)明顯變大,外周邊緣不均勻且雜亂凝集在周圍(＋)產(chǎn)生均一的凝集,凝集粒子在底部整體上呈膜狀延展(++)結(jié)果判斷陽性：未致敏粒子最終稀釋倍數(shù)1:40的反應(yīng)圖像判定為(－)，致敏粒子最終稀釋倍數(shù)1:80以上的反應(yīng)圖像判定為(＋)，即最終判定為陽性，并將顯示反應(yīng)圖像為(＋)的最高稀釋倍數(shù)作為抗體效價(jià)。陰
8、性：無論未致敏粒子呈現(xiàn)何種反應(yīng)圖像，只要致敏粒子最終稀釋倍數(shù)1:80的反應(yīng)圖像顯示為(－)時(shí)，最終判定為陰性。結(jié)果判斷2．結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)可疑：未致敏粒子最終稀釋倍數(shù)1
