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《prrsv+gp5和pcv2+orf2雙基因共表達重組腺病毒的構(gòu)建及鑒定》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、萬方數(shù)據(jù)第3l卷第9期2009年9月中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineV01．31．No．9Sep．2009PRRSVGP5和PCV2ORF2雙基因-H-，、表達重組腺病毒的構(gòu)建及鑒定于新友1，沈志強1．2’，管宇z，南松劍：，王金良z，肖躍強2，唐娜：(1．山東省畜禽用蜂膠疫苗工程技術(shù)研究中心，山東濱州256600；2．山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東濱州256600)摘要：為構(gòu)建豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)GP5基因和豬圓環(huán)病毒2
2、(PCV2)ORF2雙基因共表達重組腺病毒。將擴增的PRRSVGP5基因和PCV2ORF2基因通過IRES元件串聯(lián)，構(gòu)建重組腺病毒穿梭質(zhì)粒。PmeI酶切線性化后，轉(zhuǎn)化含有腺病毒骨架載體pAdeasy．1的大腸桿菌BJ5183感受態(tài)細胞，同源重組后篩選重組腺病毒質(zhì)粒，經(jīng)PacI酶切后轉(zhuǎn)染293A細胞進行包裝，獲得重組腺病毒。PCR鑒定表明重組腺病毒含有GP5和ORF2基因，westemblot檢測結(jié)果表明GP5基因和OI珂2基因在293A細胞內(nèi)獲得表達。關(guān)鍵詞：豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)；GP5基因；
3、豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)；ORF2基因；重組腺病毒中圖分類號：$852．65文獻標識碼：A文章編號：1008．0589(2009)09．0667．04ConstructionofrecombinantadenovirusCO—expressingPRRSVGP5geneandPCV2ORF2geneYUXin—youl，SHENZhi—qian91·鏟，GUANYu2，NANSong-jian2，WANGJin·lian92，XIAOYue—qian92，TANGNa2(1．ShandongResearch
4、andDevelopmentCenterofVeterinaryPropolisVaccines，Binzhou256600。China；2．ShandongBinzhouAnimalScienceandVeterinaryMedicineInstitute，Binzhou256600，China)Abstract：ToconstructmcombinantadnovirusthatexpressesthePRRSVGP5andPCV2ORF2proteins．recombinantshut-tieplasm
5、idWaSconstructedbylinkingthePItRSVGP5andPCV20RF2genesviaIRESgene．1rtleplasmidWaSlinerized謝nlP橢eIandtransformedintoEscherichiacoliBJ5183competentcellstoallowhomologousrecombinationwiththesupercoiledade．noviralvectorpAdEasy-1．Therecombinantadenovirusplasmidwa
6、sdigestedwithPacIandtransfectedinto293Acellstopackintoviralparticles，TherecombinantadenoviruscontainingGP5andPCV2geneWaSidentifiedbyPCR．ThewesternblotresuItsshowedthattheGP5geneofPImSVandORF2geneofPCV2wassuccessfullyexpressedin293Acells．Keywords：PRRSV；GP5ge
7、ne；PCV2；OItF2gene；recombinantadenovirus豬呼吸系統(tǒng)疾病綜合癥(Porcinerespiratorydiseasecomplex，PRDC)是危害養(yǎng)豬業(yè)一個主要疾病，豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus，PRRSV)幣II豬圓環(huán)病毒2型(Porcinecircovirus2，PCV2)被認為是PRDC的*Correspondingauthor病原體【”。PRRSV和PCV2混合感染的現(xiàn)象在豬場時
8、有發(fā)生，兩者混合感染后常常使疫情加重，死亡率增加【2】。目前，對豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)的防制主要是采用預(yù)防接種和綜合防治相結(jié)合的方法，常規(guī)的滅活苗和弱毒苗在該病的控制上雖然起收稿日期：2009-03-27基金項目：山東省自然科學(xué)基金項目(Y2006D26)作者簡介：于新友(1983．)，男，山東省菏澤市人，碩士研究生，從事基因工程疫苗方面的研究·通信作者萬方數(shù)據(jù)中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報2009年到了
