黑曲霉酸性β甘露聚糖酶的發(fā)酵工藝

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1、研究第28卷第9期李劍芳等:黑曲霉酸性件甘露聚糖酶的發(fā)醉工藝報黑曲霉酸性卜甘露聚糖酶的發(fā)酵工藝告李劍芳’王斌林’烏卜敏辰“(l.江南大學食品學院,2江南大學醫(yī)學系，無ig,214036)份2自摘要從數(shù)十株實驗室保裁和士壤分離的黑曲霉菌株中，通過篩選和物理化學誘變.獲得了1株黑曲霉酸性拼甘露聚糖酶高產菌株AspergillusnigerL-76-1。經正交試驗選出的最佳產酶培養(yǎng)基為:魔芋粉4.096,豆餅粉2.5'X,，玉米漿1.5%,CaCl21.0%,KH2POo0.1%,Na2H130,0.1%,MgSO4.7H200.

2、I%,pH6.0。優(yōu)化的發(fā)酵條件為:裝液量30mL/2511ml，三角瓶搖床轉速225r/min,發(fā)酵9.度和時間分別為(3131)T;和84h。在土述條件下，L-76-1的p一甘露聚糖酶發(fā)酵酶活力達320U/-L.關鎮(zhèn)詞f3-甘露聚糖酶.黑曲!.菌株選盲發(fā)酵工共P-甘露聚糖酶(P-1,4-D-mannanmanno-1材料與方法hydrolase,EC3.2.1.78)是一類能水解含P-1,4-D一甘露糖昔鍵的甘露聚搪(包括均一甘1.1菌種露聚糖、葡萄甘露聚糖和半乳甘露聚糖)的半黑曲霉菌株AspergillusnigerL

3、r76，從纖維素酶，廣泛存在于動植物和微生物中。數(shù)十株實驗室保藏和野生分離的黑曲霉中篩已報道的產P-甘露聚糖酶的微生物包括:細選獲得;AspergillusnigerI一，6-1，為出發(fā)菌菌中的芽袍桿菌、假單胞菌、弧菌;真菌中的株L-76的最終誘變株，由江南大學醫(yī)學系中曲霉、木霉、酵母菌、青霉和放線菌中的鏈霉心實驗室保存。菌等[，]。1.2主要原料近年來P一甘露聚糖酶的研究日益受到重魔芋粉，購自海南多環(huán)保健品有限公司;視，已在食品、醫(yī)藥、飼料、造紙、紡織、石油開槐豆膠，購自Sigma公司;甘露糖和3,5一二硝采等領域得到了廣

4、泛的應用〔卜們。大量研基水楊酸，購自上?；瘜W試劑公司。究表明，甘露寡搪可通過減少動物腸道病原1.3培并荃菌，調節(jié)免疫反應，提高腸粘膜的完整性而最1.3.1料面培養(yǎng)基終提高動物的生產性能，由此已被認為是最馬鈴薯培養(yǎng)基;用于菌種分離、斜面種子及保藏。有希望的抗生素替代品之一[151國內外對來源于不同菌種的P-甘露聚糖1.3.2篩選培養(yǎng)墓(g/l00mL)酶的研究、生產和應用報道多集中在堿性和魔芋粉2.0，豆餅粉3.0,酵母膏0.5,中性酶方面，而酸性P-甘露聚搪酶的微生物Na2HP040.1,K比P040.1,M9S(為·7踐O

5、發(fā)酵生產國內尚未見有關報道。本研究從各0.3,CaCl20.3,pH6.0;用于產酶菌株的初篩種來源的黑曲霉中篩選了1株酸性P-甘露聚和復篩。糖酶高產菌，且所產酶在酸性環(huán)境下活力高、1.3.3發(fā)酵培養(yǎng)基(g/100mL)穩(wěn)定性好，為實現(xiàn)P-甘露聚糖酶的工業(yè)化生(1)豆餅粉3.0，玉米漿1.0,Na2HP04產和在飼料工業(yè)中的廣泛應用奠定基礎。0.1,KH2PO40.1,MgSO4.7H200.1,CaC12第一作者;博士研究生副教授。收稿時間2002一01一08萬方數(shù)據(jù)研月r‘勺卜究口﹄食品與發(fā)酵工業(yè)F。創(chuàng)andFemten

6、tationlndustriesVol.28No.9﹁盯價州報州們表110株代表性產曲菌株的初篩結果川0.3,pH6.0;魔芋粉分別為2.5-4.5，用于試引“酶活力}醉活力告驗魔芋粉含量對菌株發(fā)酵產酶的影響。兩株，PH值}茵株，PH值/U-.L1/U.ML.(2)魔芋粉3.0，除豆餅粉外其余成分同L-76856.51(1);豆餅粉分別為2.0-4.0，用于試驗豆餅L-13783.50粉含量對菌株發(fā)酵產酶的影響。L-09585.92L30735.84(3)魔芋粉4.0,豆餅粉2.5,T米漿L-50356.00一牛1.5,Ca

7、CIZ1.0,KHZP氏0.1,Na2HP040.1,MgSO4.7H200.1,pH6.0。該配方是經正交2.1.2產酶菌株的復篩試驗優(yōu)化后的發(fā)酵培養(yǎng)基。初篩所選出的4株黑曲霉進行搖瓶復篩1.4酶活力測定《DNS法)產酶試驗。復篩采用每個菌株分別做3個平于20mL具塞試管A,B中，分別加入質行樣，發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵條件同初篩，實驗結量分數(shù)為0.5%的槐豆膠溶液〔用pH4.8的果見表20取其中產酶活力最高的1.-76菌乙酸一乙酸鈉緩沖液配制)2ml.,55℃預熱5株(平均88.3U/ml.)作為進一步誘變育種和min。在A管中

8、加入0.5mL適當稀釋的酶發(fā)酵上藝試驗的出發(fā)菌株。液。立即搖勻，在此溫度下準確反應10min,表24株產曲菌株的復篩結果立即在A,B中各加入2.5mLDNS試劑，B菌株醉一一活力/U-1.-t平均PH值管補加。.5mL稀釋酶液，混勻、煮沸5min,L-766.60冷卻后各加水5ML,混勻。