黑曲霉酸性β甘露聚糖酶的發(fā)酵工藝

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1、研究第28卷第9期李劍芳等:黑曲霉酸性件甘露聚糖酶的發(fā)醉工藝報(bào)黑曲霉酸性卜甘露聚糖酶的發(fā)酵工藝告李劍芳’王斌林’烏卜敏辰“(l.江南大學(xué)食品學(xué)院,2江南大學(xué)醫(yī)學(xué)系，無(wú)ig,214036)份2自摘要從數(shù)十株實(shí)驗(yàn)室保裁和士壤分離的黑曲霉菌株中，通過(guò)篩選和物理化學(xué)誘變.獲得了1株黑曲霉酸性拼甘露聚糖酶高產(chǎn)菌株AspergillusnigerL-76-1。經(jīng)正交試驗(yàn)選出的最佳產(chǎn)酶培養(yǎng)基為:魔芋粉4.096,豆餅粉2.5'X,，玉米漿1.5%,CaCl21.0%,KH2POo0.1%,Na2H130,0.1%,MgSO4.7H200.

2、I%,pH6.0。優(yōu)化的發(fā)酵條件為:裝液量30mL/2511ml，三角瓶搖床轉(zhuǎn)速225r/min,發(fā)酵9.度和時(shí)間分別為(3131)T;和84h。在土述條件下，L-76-1的p一甘露聚糖酶發(fā)酵酶活力達(dá)320U/-L.關(guān)鎮(zhèn)詞f3-甘露聚糖酶.黑曲!.菌株選盲發(fā)酵工共P-甘露聚糖酶(P-1,4-D-mannanmanno-1材料與方法hydrolase,EC3.2.1.78)是一類(lèi)能水解含P-1,4-D一甘露糖昔鍵的甘露聚搪(包括均一甘1.1菌種露聚糖、葡萄甘露聚糖和半乳甘露聚糖)的半黑曲霉菌株AspergillusnigerL

3、r76，從纖維素酶，廣泛存在于動(dòng)植物和微生物中。數(shù)十株實(shí)驗(yàn)室保藏和野生分離的黑曲霉中篩已報(bào)道的產(chǎn)P-甘露聚糖酶的微生物包括:細(xì)選獲得;AspergillusnigerI一，6-1，為出發(fā)菌菌中的芽袍桿菌、假單胞菌、弧菌;真菌中的株L-76的最終誘變株，由江南大學(xué)醫(yī)學(xué)系中曲霉、木霉、酵母菌、青霉和放線(xiàn)菌中的鏈霉心實(shí)驗(yàn)室保存。菌等[，]。1.2主要原料近年來(lái)P一甘露聚糖酶的研究日益受到重魔芋粉，購(gòu)自海南多環(huán)保健品有限公司;視，已在食品、醫(yī)藥、飼料、造紙、紡織、石油開(kāi)槐豆膠，購(gòu)自Sigma公司;甘露糖和3,5一二硝采等領(lǐng)域得到了廣

4、泛的應(yīng)用〔卜們。大量研基水楊酸，購(gòu)自上海化學(xué)試劑公司。究表明，甘露寡搪可通過(guò)減少動(dòng)物腸道病原1.3培并荃菌，調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，提高腸粘膜的完整性而最1.3.1料面培養(yǎng)基終提高動(dòng)物的生產(chǎn)性能，由此已被認(rèn)為是最馬鈴薯培養(yǎng)基;用于菌種分離、斜面種子及保藏。有希望的抗生素替代品之一[151國(guó)內(nèi)外對(duì)來(lái)源于不同菌種的P-甘露聚糖1.3.2篩選培養(yǎng)墓(g/l00mL)酶的研究、生產(chǎn)和應(yīng)用報(bào)道多集中在堿性和魔芋粉2.0，豆餅粉3.0,酵母膏0.5,中性酶方面，而酸性P-甘露聚搪酶的微生物Na2HP040.1,K比P040.1,M9S(為·7踐O

5、發(fā)酵生產(chǎn)國(guó)內(nèi)尚未見(jiàn)有關(guān)報(bào)道。本研究從各0.3,CaCl20.3,pH6.0;用于產(chǎn)酶菌株的初篩種來(lái)源的黑曲霉中篩選了1株酸性P-甘露聚和復(fù)篩。糖酶高產(chǎn)菌，且所產(chǎn)酶在酸性環(huán)境下活力高、1.3.3發(fā)酵培養(yǎng)基(g/100mL)穩(wěn)定性好，為實(shí)現(xiàn)P-甘露聚糖酶的工業(yè)化生(1)豆餅粉3.0，玉米漿1.0,Na2HP04產(chǎn)和在飼料工業(yè)中的廣泛應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。0.1,KH2PO40.1,MgSO4.7H200.1,CaC12第一作者;博士研究生副教授。收稿時(shí)間2002一01一08萬(wàn)方數(shù)據(jù)研月r‘勺卜究口﹄食品與發(fā)酵工業(yè)F。創(chuàng)andFemten

6、tationlndustriesVol.28No.9﹁盯價(jià)州報(bào)州們表110株代表性產(chǎn)曲菌株的初篩結(jié)果川0.3,pH6.0;魔芋粉分別為2.5-4.5，用于試引“酶活力}醉活力告驗(yàn)?zāi)в蠓酆繉?duì)菌株發(fā)酵產(chǎn)酶的影響。兩株，PH值}茵株，PH值/U-.L1/U.ML.(2)魔芋粉3.0，除豆餅粉外其余成分同L-76856.51(1);豆餅粉分別為2.0-4.0，用于試驗(yàn)豆餅L-13783.50粉含量對(duì)菌株發(fā)酵產(chǎn)酶的影響。L-09585.92L30735.84(3)魔芋粉4.0,豆餅粉2.5,T米漿L-50356.00一牛1.5,Ca

7、CIZ1.0,KHZP氏0.1,Na2HP040.1,MgSO4.7H200.1,pH6.0。該配方是經(jīng)正交2.1.2產(chǎn)酶菌株的復(fù)篩試驗(yàn)優(yōu)化后的發(fā)酵培養(yǎng)基。初篩所選出的4株黑曲霉進(jìn)行搖瓶復(fù)篩1.4酶活力測(cè)定《DNS法)產(chǎn)酶試驗(yàn)。復(fù)篩采用每個(gè)菌株分別做3個(gè)平于20mL具塞試管A,B中，分別加入質(zhì)行樣，發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵條件同初篩，實(shí)驗(yàn)結(jié)量分?jǐn)?shù)為0.5%的槐豆膠溶液〔用pH4.8的果見(jiàn)表20取其中產(chǎn)酶活力最高的1.-76菌乙酸一乙酸鈉緩沖液配制)2ml.,55℃預(yù)熱5株(平均88.3U/ml.)作為進(jìn)一步誘變育種和min。在A管中

8、加入0.5mL適當(dāng)稀釋的酶發(fā)酵上藝試驗(yàn)的出發(fā)菌株。液。立即搖勻，在此溫度下準(zhǔn)確反應(yīng)10min,表24株產(chǎn)曲菌株的復(fù)篩結(jié)果立即在A,B中各加入2.5mLDNS試劑，B菌株醉一一活力/U-1.-t平均PH值管補(bǔ)加。.5mL稀釋酶液，混勻、煮沸5min,L-766.60冷卻后各加水5ML,混勻。