黑曲霉固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)酸性β甘露聚糖酶

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1、第$+卷第$期生物技術(shù)9<="$+，C<"$+((+年+月6RD_OA;CD0DXTWK]"+((+""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""［!］岳文斌，康俊卿，郭棟生，等"高鋅日糧對蛋雞生產(chǎn)性能和蛋鋅含量+"+凝血酶的離交分離和純化：通過!+,離子交換樹脂柱對的研究［#］"營養(yǎng)學(xué)報，$%%&，$（!’）：’()*’$$"獲得的凝血酶粗酶液進行了分離純化，洗脫圖如圖$所示，圖豬血凝血酶的制備中自左向右的三個洗脫峰依次為穿過離交柱的雜蛋白峰，洗施大林，陸茂林，呂惠敏，陳金林脫下

2、來的雜蛋白峰和凝血酶峰。（江蘇省微生物研究所，江蘇無錫+$,(-’）由洗脫圖可以看出，通過!+,離子交換樹脂可以使雜蛋白摘要：從豬血制備凝血酶，對丙酮沉淀法和離子交換樹脂和凝血酶很好地分開，且凝血酶出峰較集中，從而可使凝血酶法進行了比較，結(jié)果表明，兩種方法的得率分別為+’((./0和的純度大大提高。&-((./0，酶比活分別為$&./12和’-"&./12。關(guān)鍵詞：豬血凝血酶；制備+"’丙酮沉淀法和離交樹脂法的比較：丙酮沉淀法和離中圖分類號：3)$,"$文獻標(biāo)識碼：4文章編號：$((,*’$$5（+((+）($*((+-*($豬血凝血酶是近年國內(nèi)研究開發(fā)的一種新

3、型速效局部止血藥，止血機理是促使血液中的纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白，同時促使血小板聚集，加速血液凝固，達到迅速止血的目的。國外對凝血酶的研究較早［$］，產(chǎn)品主要是人血凝血酶，本文報道了離子交換樹脂法從豬血制備凝血酶的新工藝。$材料和方法$"$材料$"$"$新鮮豬血：采自無錫市食品公司。圖$凝血酶離交柱洗脫圖$"$"+試劑：凝血酶標(biāo)準(zhǔn)品：中國藥品生物檢定所；牛纖維蛋子交換樹脂法制備凝血酶，兩種方法的工藝和凝血酶得率及白原；中國藥品生物檢定所；凍干人纖維蛋白質(zhì)；衛(wèi)生部上海比活比較如表+。生物制品所；!+,離子交換樹脂；上海樹脂廠；其它試劑均為分+",結(jié)論：從豬血制備凝

4、血酶，國內(nèi)報道較少。本文得出的制析純。備凝血酶的最佳工藝條件為：血漿稀釋%倍后等電點沉淀，沉$"$"’儀器：紫外分光光度計89*$%(，日本島津公司；酸度淀以$(@ABA=+激活，激活后獲得的凝血酶粗酶液離子交換樹計:;7*+&，上海雷磁儀器廠。脂分離純化，收集凝血酶活性峰制得凝血酶成品。從本文的$"+方法結(jié)果看，采用離子交換樹脂法從豬血制備凝血酶，避免了有機$"+"$凝血酶粗酶液的制備：新鮮豬血，高速離心機低溫離溶劑沉淀造成的酶失活，并且去除了大量的雜蛋白，使凝血酶心，棄去血細胞，收集血漿，血漿以去離子水稀釋，+1<=/0醋酸的得率及比活都有了較大的提高，離交

5、樹脂法的得率和比活溶液調(diào)節(jié)>;&"$，,?靜置過夜，虹吸去上層清液，離心收集凝均為丙酮沉淀法的+",倍。血酶原沉淀；沉淀以緩沖液溶解，以$(@ABA=+溶液激活，過濾參考文獻：收集濾液即得凝血酶粗酶液。［$］A;G;HIF"JKLM

6、［’］中華人民共和國藥典委員會"中華人民共和國藥典［J］"北京：化$"+"’凝血酶干粉的制備：上述粗酶液以$1<=/0;A=調(diào)節(jié)學(xué)工業(yè)出版社，$%%&，$$+)*$$+%">;至&"$，離心棄沉淀，上清以$1<=/0的CBD;調(diào)節(jié)>;至-",邊攪拌邊加入’倍體積的冰丙酮，,?靜置過夜，次日收集沉黑曲霉固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)酸性!*甘露聚糖酶淀，沉淀以無水乙醚洗滌，置真空干燥箱真空干燥，即得凝血李江華，鄔敏辰，房峻，鄔顯章酶粗酶粉。（江南大學(xué)生物工程學(xué)院，江蘇無錫+$,(’-）表$血清稀釋度對酶活的影響摘要：以黑曲霉G4’($為生產(chǎn)菌固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)酸性!*稀釋度（倍）&!%$

7、(甘露聚糖酶，較適的培養(yǎng)基組成和培養(yǎng)條件為：麩皮$(2，魔芋酶活性（./1=）$$)$-&$))$)%粉(",2，豆餅粉$"&2，硫酸銨("+2，起始濕度&&@，>;自然，發(fā)表+丙酮沉淀法和離交樹脂法的比較酵溫度’&?，發(fā)酵周期約%-M。在此條件下，G4’($的酸性!*得率!（./0）酶比活（./12）工藝周期（E）甘露聚糖酶產(chǎn)率為%&(8/2干曲左右。丙酮沉淀法+’(($&,關(guān)鍵詞：固態(tài)發(fā)酵；酸性!*甘露聚糖酶；黑曲霉離交樹脂法&-((’-"&+中圖分類號：3&&-文獻標(biāo)識碼：4文章編號：$((,*’$$5!得率為每升豬血所獲得的凝血酶（+((+）($*((+

8、-*(’從表$看，血清稀