血細(xì)胞分析儀檢測(cè)原理與影響因素

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1、血細(xì)胞分析儀檢測(cè)原理與影響因素前言傳統(tǒng)的血常規(guī)分析法完全采用手工法。20世紀(jì)50年代，庫爾特（W.H.Coulter）先生根據(jù)電阻抗原理，又稱庫爾特原理，生產(chǎn)出第一臺(tái)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，開創(chuàng)了血細(xì)胞分析儀的新紀(jì)元，使人工計(jì)數(shù)實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，血細(xì)胞分析儀也日新月異，目前己普及至縣或衛(wèi)生院。前言美國(guó)COULTER公司的STKS、MAXM系列血細(xì)胞分析儀--電阻抗、高頻電導(dǎo)及激光散射聯(lián)合檢測(cè)法Bayer公司的Advia120型和新近推出的Advia2120型血細(xì)胞分析儀--激光和細(xì)胞化學(xué)法日本東亞公司的NE1500、SYSMEX公司的

2、SE9000血細(xì)胞分析儀--電阻抗和射頻電導(dǎo)聯(lián)合檢測(cè)法ABBOTT公司的CD3000，CD3500血細(xì)胞分析儀--多角度激光偏振光散射檢測(cè)法常用的血細(xì)胞分析儀：血細(xì)胞分析儀的主要功能血細(xì)胞計(jì)數(shù)功能測(cè)量WBC、RBC、PLT、MCV、RET等白細(xì)胞分類功能測(cè)量NE%、LYM%、MO%、EO%、BA%等血紅蛋白檢測(cè)功能測(cè)量HGB血細(xì)胞計(jì)數(shù)的檢測(cè)原理電阻抗法流式細(xì)胞術(shù)與光散射法檢測(cè)原理電阻抗法檢測(cè)原理血細(xì)胞具有相對(duì)非導(dǎo)電的性質(zhì)懸浮在電解質(zhì)溶液中的血細(xì)胞顆粒通過計(jì)數(shù)小孔時(shí)可引起電阻及電壓的變化，出現(xiàn)脈沖信號(hào)脈沖的數(shù)量==細(xì)胞的數(shù)量脈沖的大小==細(xì)胞

3、的大小該原理又稱庫爾特原理（Coulterprinciple）測(cè)量RBC,WBC,PLT,MCV,MPV電阻抗法檢測(cè)原理電阻抗法影響因素白細(xì)胞:由于多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、淋巴系統(tǒng)增殖性疾病、轉(zhuǎn)移癌、自身免疫性疾病、感染及某些原因不明疾病血中含有冷球蛋白，或骨髓瘤、癌癥、白血病、妊娠、血栓疾病、糖尿病病人血中存在有冷纖維蛋白等，均可導(dǎo)致血液中某些物質(zhì)凝集，致使白細(xì)胞計(jì)數(shù)增高。此時(shí)將稀釋標(biāo)本放在37度水浴10min后立即計(jì)數(shù)可消除此影響.有核紅細(xì)胞出現(xiàn)使白細(xì)胞計(jì)數(shù)假性增高；低色素性貧血或紅細(xì)胞內(nèi)含大量sHb或HbCO，或某些新生兒及某些肝

4、病病人紅細(xì)胞膜脂類異常,從而產(chǎn)生抗溶血?jiǎng)┳饔茫t細(xì)胞溶解不完全；多發(fā)性骨髓瘤的M蛋白增多時(shí)，PH低的情況下，M蛋白可與溶血?jiǎng)┌l(fā)生反應(yīng)而使結(jié)果偏高；各種病理引起的血栓前狀態(tài)使血小板易于聚集，上機(jī)時(shí)影響結(jié)果電阻抗法影響因素紅細(xì)胞:血小板:紅細(xì)胞碎片和脂血中與血小板大小相似的乳糜微粒等作為血小板計(jì)數(shù)，導(dǎo)致血小板計(jì)數(shù)偏高。RBC:在某種病理情況下，如白血病，白細(xì)胞數(shù)明顯增加而又伴嚴(yán)重貧血時(shí)，即可使所得各項(xiàng)參數(shù)產(chǎn)生明顯誤差。MCH:不能探測(cè)單個(gè)紅細(xì)胞的結(jié)構(gòu)（MCH=總HGB/RBC）MCV及MCHC:紅細(xì)胞通過小孔時(shí)經(jīng)受一定的形態(tài)學(xué)變化，紅細(xì)胞形態(tài)與

5、細(xì)胞質(zhì)黏度有關(guān)，細(xì)胞質(zhì)黏度受細(xì)胞HGB含量影響，因此HGB濃度可影響細(xì)胞形態(tài)，進(jìn)而影響MCV及MCHC的準(zhǔn)確性（MCHC=HGB/HCT)流式細(xì)胞術(shù)與光散射法檢測(cè)原理白細(xì)胞計(jì)數(shù)紅細(xì)胞和血小板計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)有核紅細(xì)胞計(jì)數(shù)流式細(xì)胞術(shù)與光散射法檢測(cè)原理白細(xì)胞計(jì)數(shù)利用流式細(xì)胞術(shù),單個(gè)細(xì)胞隨著流體動(dòng)力聚集的鞘流液通過激光照射的檢測(cè)區(qū)時(shí),使光束發(fā)生折射、衍射和散射散射光由光檢測(cè)器接受后產(chǎn)生脈沖脈沖的大小與被照細(xì)胞的大小成正比脈沖的數(shù)量代表細(xì)胞的數(shù)量流式細(xì)胞術(shù)與光散射法檢測(cè)原理紅細(xì)胞和血小板計(jì)數(shù)在紅細(xì)胞/血小板通道中，RBC/PLT試劑與血液混合反應(yīng)

6、，將自然狀態(tài)下的紅細(xì)胞/血小板變成球形并經(jīng)戊二醛固定后使單個(gè)細(xì)胞逐個(gè)經(jīng)過檢測(cè)器低角度前向激光（2°～3°）測(cè)量單個(gè)細(xì)胞體積與總數(shù)高角度激光（5°～15°）測(cè)量單個(gè)細(xì)胞的折射指數(shù)(RI)根據(jù)單個(gè)細(xì)胞體積和其相應(yīng)細(xì)胞的折射指數(shù)，可將紅細(xì)胞和血小板區(qū)分開來，并準(zhǔn)確得出相應(yīng)的參數(shù)。細(xì)胞的折射指數(shù)(RI):反映細(xì)胞內(nèi)容物的濃度。流式細(xì)胞術(shù)與光散射法檢測(cè)原理紅細(xì)胞和血小板計(jì)數(shù)紅細(xì)胞體積和血紅蛋白濃度散射圖1低角度光散射（2°-3°）2高角度光散射（5°-15°）3含有紅細(xì)胞的Mie圖4紅細(xì)胞方法中檢測(cè)的血小板流式細(xì)胞術(shù)與光散射法檢測(cè)原理網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)網(wǎng)

7、織紅細(xì)胞分析采用某些染料（如核酸染料Oxazine750）染色的原理，并將細(xì)胞球形化，用激光二維法對(duì)網(wǎng)織紅細(xì)胞進(jìn)行分析測(cè)定。前向角光散射強(qiáng)度==細(xì)胞大小熒光強(qiáng)度==胞內(nèi)RNA濃度根據(jù)熒光強(qiáng)度，可將網(wǎng)織紅細(xì)胞分成低吸收熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞（LFR)、中吸收熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞(MFR)和高吸收熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞(HFR)三部分。幼稚網(wǎng)織紅細(xì)胞顯示最強(qiáng)的熒光流式細(xì)胞術(shù)與光散射法檢測(cè)原理儀器還可提供網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟指數(shù)（reticulocytematureindex，RMI）。RMI=網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)RMI增高與骨髓移植、慢性溶血、近期出血或療效反應(yīng)有關(guān)

8、；RMI降低通常提示骨髓衰竭或無效造血。HFR+MFRLFR流式細(xì)胞術(shù)與光散射法影響因素病人樣品中的有核紅細(xì)胞(尤其是新生兒樣品)能夠使白細(xì)胞計(jì)數(shù)假性升高。樣品的冷凝集現(xiàn)象可能引