正交設(shè)計法優(yōu)選老鷹茶總皂苷的提取工藝研究

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1、正交設(shè)計法優(yōu)選老鷹茶總皂苷的提取工藝研究作者：陸維麗李俊周維晨程文明湯文建【摘要】　　目的對從老鷹茶中提取總皂苷的工藝進行優(yōu)化。方法以齊墩果酸為對照品，香草醛-高氯酸法顯色，用紫外分光光度法在550nm處測定總皂苷含量。采用L9正交設(shè)計，以老鷹茶總皂苷含量為考察指標，考察乙醇濃度、提取時間、乙醇用量、提取次數(shù)4個因素對提取的影響。結(jié)果最佳提取工藝為80%乙醇，12倍量，回流提取3次，1h/次。結(jié)論該工藝經(jīng)實驗重復(fù)性好，對進一步的工藝開發(fā)有較好的參考價值。【關(guān)鍵詞】老鷹茶總皂苷正交實驗紫外分光光度法老鷹茶系樟科木姜子屬毛豺皮樟LitseacoreanaLev

2、e的葉，俗稱“白茶”，分布于云南、貴州、四川、安徽等地。民間飲用表明老鷹茶具有解毒消腫、明目益思、生津止渴、解表防暑等功效，且無毒副作用，為藥食同源植物［1］，長期飲用有益于健康。老鷹茶中含有黃酮、皂苷、有機酸、香豆素和鞣質(zhì)等成分，其中皂苷類成分含量豐富［2］。研究老鷹茶的化學成分，對研究天然產(chǎn)物化學多樣性，以及尋找新的藥用成分具有重要意義。為了有效開發(fā)和利用資源，本文采用正交實驗對老鷹茶總皂苷的提取工藝進行了研究。1儀器與試藥儀器722S分光光度計；8453紫外-可見分光光度計(Agilent)；電子天平BP211D(Sartorius)；GSY-8電熱

3、恒溫水浴鍋；EK-S5AB電熱真空干燥箱。試藥齊墩果酸標準品，購自中國藥品生物制品檢定所；老鷹茶，XX-05購自安徽省寧國縣茶農(nóng)，陰干備用，經(jīng)植物學鑒定為樟科木姜子屬毛豺皮樟LitseacoreanaLeve的葉。試劑均為分析純，水為雙蒸餾水。方法與結(jié)果.1標準曲線的制作［3］精密稱取經(jīng)120℃干燥至恒重的齊墩果酸標準品mg，置于2ml容量瓶中，甲醇定容，搖勻，即得對照品溶液(每毫升含齊墩果酸標準品)。精密量取對照品溶液，，，，，ml于10ml試管中，抽干甲醇，加%香草醛，高氯酸，搖勻于60℃水浴中加熱1min，冷卻，加冰醋酸ml，搖勻。以相應(yīng)試劑做空白，

4、在8453紫外-可見分光光度計上進行全波長掃描，最大吸收波長為550nm。按分光光度法在550nm波長處測定吸光度。以吸光度值(Y)為縱坐標，對照品濃度(X)為橫坐標繪圖，得回歸線性方程Y=，r=，線性范圍：～·L-1。.2提取溶劑的選擇.水提取法精密稱取老鷹茶g，加水50ml，在水浴上加熱回流提取1h，趁熱過濾，共提取2次，洗滌殘渣，合并濾液和洗滌液，蒸干溶劑。固體水溶后，正丁醇萃取，萃取液過氧化鋁柱，收集流出液，定容至200ml容量瓶中，搖勻，待用。.乙醇提取法精密稱取老鷹茶g，加80%乙醇50ml，在水浴上加熱回流提取1h，趁熱過濾，共提取2次，洗滌

5、殘渣，合并濾液和洗滌液，蒸干溶劑。固體水溶后，正丁醇萃取，萃取液過氧化鋁柱，收集流出液，定容至200ml容量瓶中，搖勻，待用。.樣品中總皂苷的含量測定精密量取供試品溶液，按標準曲線方法進行操作，測定吸光度值，由回歸方程計算樣品中總皂苷的含量。結(jié)果見表1。表1提取溶劑與含量的關(guān)系.3正交實驗設(shè)計與結(jié)果根據(jù)藥材性質(zhì)和生產(chǎn)實際要求，擬定影響浸出效果的4個主要因素，即A為乙醇濃度(%)，B為乙醇用量(倍體積)，C為提取時間(h/次），D為提取次數(shù)，每個因素選擇3個水平，編制因素水平表見表2。表2因素水平稱取適量老鷹茶干燥粗粉9份，按正交實驗設(shè)計的工藝進行提取，以老

6、鷹茶提取物中總皂苷含量為考核指標，對正交實驗結(jié)果進行方差分析見表3～4。表3正交試驗(L934)直觀分析表4方差分析根據(jù)分析結(jié)果可知，各個因素對老鷹茶總皂苷提取效果的影響程度依次為A>D>C>B，且對提取效果影響有統(tǒng)計學意義的因素是因素A。綜合直觀分析和方差分析的結(jié)果，老鷹茶總皂苷理想的提取工藝方案是A3B3C1D3，即用12倍量的80%乙醇，回流提取3次，1h/次。.4提取工藝的驗證實驗為進一步考察上述最佳工藝的穩(wěn)定性和合理性，按該工藝條件進行重復(fù)性實驗3次，分別測定老鷹茶總皂苷的含量。結(jié)果見表5。測定的結(jié)果均等于或優(yōu)于正交實驗表中的任何一組，重復(fù)性好，

7、RSD=%(n=3)。說明該工藝穩(wěn)定可行。表5最佳工藝的驗證實驗討論　　香草醛-高氯酸法顯色體系最大吸收波長在550nm處，該顯色體系呈色穩(wěn)定，但由于老鷹茶粗提物中有色物質(zhì)的干擾，粗提物須經(jīng)過氧化鋁脫色。樣品脫色后顯色在近550nm處有最大吸收，因此該顯色體系可用于老鷹茶總皂苷含量測定。　　由正交實驗的直觀分析和方差分析結(jié)果可知，從總皂苷這一指標來看，因素A的影響最大，差異性最為顯著；老鷹茶總皂苷的最佳提取工藝為12倍量的80%乙醇，回流提取3次，1h/次。本實驗優(yōu)選出的工藝簡單，操作容易，穩(wěn)定性好。【參考文獻】　?。?］李延松.老鷹茶資源調(diào)查與開發(fā)利用［

8、J］.貴州茶葉,1995,4:10.　?。?］郁建平,古練權(quán).貴州