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1、正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選重樓皂苷提取工藝的研究【摘要】目的優(yōu)選重樓皂苷的最佳提取工藝條件。方法以薯蕷皂苷元的含量為考察指標(biāo)，用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定其含量，采用正交實(shí)驗(yàn)法對(duì)重樓皂苷的提取工藝進(jìn)行優(yōu)選。結(jié)果最佳提取工藝為重樓藥材粗粉加8倍量85%的乙醇回流2次，1.5h/次。結(jié)論優(yōu)化得到的工藝簡(jiǎn)便易行，穩(wěn)定性好?！娟P(guān)鍵詞】重樓；薯蕷皂苷元；提取工藝；正交實(shí)驗(yàn) OptimizationofExtractionProcessofSaponinsofParisPolyphyllaizetheextractionprocesssaponinsofPa
2、rispolyphylla.MethodsTheorthogonaldesignmethodizeextractionprocessforsaponinsofParispolyphyllaountofDiosgeninasobservingindex.ResultsTheoptimumextractingprocedurees,eandrefluxingniyminuteseachtime.ConclusionTheoptimumextractingprocessissimple,stableandefficient. Keyethod重
3、樓為百合科植物云南重樓PairspolyphyllaSmithvar.yunnanensis(Franch.)Hand.-Mazz.或七葉一枝花ParispolyphyllaSmithvar.chinensis(Franch.)Hara的干燥根莖［1］。重樓中的化學(xué)成分主要以甾體皂苷類為主，是其主要活性成分。其苷元主要為異螺甾烷醇類的薯蕷皂苷元和偏諾皂苷元［2，3］。現(xiàn)代藥理研究表明該藥具有抗腫瘤、抗菌消炎、止血、鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛、抑制精子活性、免疫調(diào)節(jié)等廣泛的藥理活性［4］。為了更好地開發(fā)利用重樓藥材，為含重樓中成藥制劑開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，本實(shí)驗(yàn)以
4、薯蕷皂苷元轉(zhuǎn)移率為指標(biāo)，采用正交實(shí)驗(yàn)法對(duì)重樓皂苷的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化選擇獲得最佳提取工藝條件?！ ?材料與方法 1.1儀器及材料 Agilent1100高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫科技公司)，VilliporeSimplicity-185超純水器(美國(guó)密里博公司)；薯蕷皂苷元對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所）；重樓藥材（購(gòu)于廣西中醫(yī)學(xué)院一附院仁愛分院藥房）；HPLC用水為超純水，甲醇、乙腈為色譜純，其它試劑為分析純?！ ?.2色譜條件色譜柱：AgilentZorbaxEclipseXDB-C8(4.6mm×150mm,5μm)；流動(dòng)相：乙腈：
5、水（80:20）；柱溫：30℃；流速：1.0ml·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：203nm；理論塔板數(shù)按薯蕷皂苷元峰計(jì)不應(yīng)低于8000?！ ?.3對(duì)照品溶液的制備精密稱取薯蕷皂苷元對(duì)照品5.04mg，用甲醇定容至10ml，搖勻，即得?！ ?.4供試品溶液的制備及測(cè)定重樓藥材經(jīng)干燥并粉碎后，準(zhǔn)確稱取3g，按正交設(shè)計(jì)進(jìn)行回流提取，趁熱濾過，合并二次提取液，回收乙醇至干。加2mol/L的鹽酸30ml，置于沸水浴中水解2h，冷卻后用石油醚(60～90℃)萃取5次，20ml/次，合并萃取液，水洗至中性，回收石油醚至干，殘?jiān)眉状既芙舛ㄈ萦?5ml容量瓶中，作
6、為供試品溶液。在上述色譜條件下，分別精密量取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算供試品液中薯蕷皂苷元含量?！ ?.5線性關(guān)系考察精密吸取薯蕷皂苷元對(duì)照品溶液5,10,15,20,25μl，進(jìn)樣，測(cè)定，以薯蕷皂苷元的量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程為Y=616.3135X+52.9100，r=0.9999，表明薯蕷皂苷元含量在2.52～12.6μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。 1.6正交實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)根據(jù)重樓活性成分的性質(zhì)及初步預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，采用L9(34)正交表安排重樓用乙醇提取工藝，以薯蕷皂苷元的轉(zhuǎn)移
7、率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，選擇乙醇濃度、溶劑用量、提取時(shí)間3個(gè)因素，每個(gè)因素設(shè)3個(gè)水平，因素水平見表1，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)結(jié)果見表2，方差分析見表3。表1重樓皂苷提取工藝因素水平（略）表2乙醇提取工藝正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果（略）表3方差分析（略） 2結(jié)果 2.1直觀分析由直觀分析（表2）得各個(gè)因素的主次順序?yàn)镃>A>B，即回流時(shí)間>乙醇濃度>乙醇用量，最佳方案為C3A2B3?！ ?.2方差分析由方差分析（表3）得各個(gè)因素的主次順序?yàn)镃>A>B，乙醇濃度和回流時(shí)間對(duì)結(jié)果有顯著性影響，乙醇用量對(duì)結(jié)果的影響無顯著性，但是用8倍量提取
8、對(duì)提取效果還是有明顯的增強(qiáng)，結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)，將乙醇倍數(shù)選為8倍，即提取工藝為A2B3C3，即加85%乙醇8倍量，回流提取兩次，1.5h/次?！ ?.3驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確稱量重樓藥粉3份
