粉紋夜蛾顆粒體病毒增強蛋白結(jié)構(gòu)與功能的初步研究 [課件]

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1、粉紋夜蛾顆粒體病毒增強蛋白結(jié)構(gòu)與功能的初步研究導(dǎo)師：鐘江教授研究生：王立娟，992305研究方向：分子病毒學(xué)生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)專業(yè)2002年6月10日復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文主要內(nèi)容和時間安排選題背景實驗材料和方法實驗結(jié)果與分析總結(jié)與展望預(yù)計時間：30分鐘8/7/20212粉紋夜蛾顆粒體病毒增強蛋白結(jié)構(gòu)與功能的初步研究王立娟桿狀病毒概述桿狀病毒：雙鏈DNA病毒，有囊膜，感染昆蟲分類：核型多角體病毒屬（NPV)顆粒體病毒屬（GV)形態(tài)與結(jié)構(gòu)——兩種表型：包涵體來源型病毒（ODV）出芽型病毒（BV）。8/7/20213粉紋夜蛾顆粒體病毒增強蛋白結(jié)構(gòu)與功能的初步研究王立娟桿狀病毒

2、粒子的兩種表型BVODV8/7/20214粉紋夜蛾顆粒體病毒增強蛋白結(jié)構(gòu)與功能的初步研究王立娟桿狀病毒雙相生活史第一時相：時間：感染后的0-24小時結(jié)果：產(chǎn)生大量的BV，出芽釋放，在蟲體內(nèi)傳播第二時相：時間：感染24小時以后結(jié)果：形成大量的ODV，被多角體蛋白包裹，最終形成多角體，經(jīng)口感染其它宿主8/7/20215粉紋夜蛾顆粒體病毒增強蛋白結(jié)構(gòu)與功能的初步研究王立娟桿狀病毒多角體電鏡中看到的野生型AcMNPV的多角體8/7/20216粉紋夜蛾顆粒體病毒增強蛋白結(jié)構(gòu)與功能的初步研究王立娟多角體的形成病毒感染的極晚期表達多角體蛋白多角體蛋白占細胞中總蛋白的50%依靠核定位信號

3、序列運送到細胞核多角體蛋白包裹ODV，形成多角體8/7/20217粉紋夜蛾顆粒體病毒增強蛋白結(jié)構(gòu)與功能的初步研究王立娟干擾多角體形成的因素多角體蛋白基因：AcMNPV多角體蛋白的3個Trp被Lys34,His36,和Phe37替代——多角體能夠結(jié)晶，但形態(tài)差異大，病毒粒子的包埋受影響AcMNPV多角體蛋白第25位的Asp變?yōu)镚ly——僅產(chǎn)生一個不正常的大立方形的多角體，不包埋病毒粒子25K基因：該基因突變后多角體數(shù)量減少8/7/20218粉紋夜蛾顆粒體病毒增強蛋白結(jié)構(gòu)與功能的初步研究王立娟多角體的生物學(xué)功能作用保護病毒粒子感染昆蟲所必需8/7/20219粉紋夜蛾顆粒體病毒

4、增強蛋白結(jié)構(gòu)與功能的初步研究王立娟選題背景—桿狀病毒的應(yīng)用桿狀病毒的應(yīng)用：a.桿狀病毒表達載體系統(tǒng)b.桿狀病毒生物殺蟲劑8/7/202110粉紋夜蛾顆粒體病毒增強蛋白結(jié)構(gòu)與功能的初步研究王立娟桿狀病毒表達載體系統(tǒng)的優(yōu)點可以容納大的插入片段（約10kbp）；高效表達；產(chǎn)物有毒性也可表達；有外源DNA插入座位；可以同時表達多個外源蛋白可轉(zhuǎn)譯后加工修飾；可在細胞系內(nèi)表達，也可在昆蟲活體內(nèi)表達；安全性好8/7/202111粉紋夜蛾顆粒體病毒增強蛋白結(jié)構(gòu)與功能的初步研究王立娟選題背景—桿狀病毒的應(yīng)用桿狀病毒的應(yīng)用：a.桿狀病毒表達載體系統(tǒng)b.桿狀病毒生物殺蟲劑8/7/202112粉

5、紋夜蛾顆粒體病毒增強蛋白結(jié)構(gòu)與功能的初步研究王立娟桿狀病毒生物殺蟲劑優(yōu)點：安全有效，不污染環(huán)境，有后效。缺點：殺蟲速度慢殺蟲譜狹窄8/7/202113粉紋夜蛾顆粒體病毒增強蛋白結(jié)構(gòu)與功能的初步研究王立娟桿狀病毒生物殺蟲劑構(gòu)建重組桿狀病毒殺蟲劑的策略：a.表達昆蟲激素b.表達昆蟲特異性毒素c.刪除內(nèi)源性桿狀病毒基因d.應(yīng)用增強蛋白來增強病毒的毒力8/7/202114粉紋夜蛾顆粒體病毒增強蛋白結(jié)構(gòu)與功能的初步研究王立娟增強蛋白（Enhancin）En-Tn編碼901個氨基酸，分子量為104ku是一種金屬蛋白酶：都具有金屬蛋白酶的金屬離子結(jié)合基序：HE（L/I）GH8/7/20

6、2115粉紋夜蛾顆粒體病毒增強蛋白結(jié)構(gòu)與功能的初步研究王立娟增強蛋白（Enhancin）在Genebank中運行Blast檢索工具得到19條明顯具有同源性的序列，去掉重復(fù)和非全長序列，共有13種不同的類似于增強蛋白的蛋白。8/7/202116粉紋夜蛾顆粒體病毒增強蛋白結(jié)構(gòu)與功能的初步研究王立娟桿狀病毒增強蛋白間的進化關(guān)系（Clustal法）8/7/202117粉紋夜蛾顆粒體病毒增強蛋白結(jié)構(gòu)與功能的初步研究王立娟增強蛋白的增效機理昆蟲的圍食膜增強蛋白作用機理：降解圍食膜蛋白—粘蛋白IIM提高圍食膜的通透性桿狀病毒更容易進入昆蟲體內(nèi)8/7/202118粉紋夜蛾顆粒體病毒增強蛋

7、白結(jié)構(gòu)與功能的初步研究王立娟利用增強蛋白提高AcMNPV感染力問題：表達增強蛋白的重組桿狀病毒殺蟲劑不形成多角體或多角體稀少對增強蛋白的結(jié)構(gòu)和功能了解不夠增強蛋白與多角體形成的相互作用增強蛋白的在細胞中的分布及機理8/7/202119粉紋夜蛾顆粒體病毒增強蛋白結(jié)構(gòu)與功能的初步研究王立娟項目來源和研究目的項目來源：國家自然科學(xué)基金（39870006）研究目的：進一步了解增強蛋白的結(jié)構(gòu)和功能，更好的利用增強蛋白提高桿狀病毒的殺蟲效果。8/7/202120粉紋夜蛾顆粒體病毒增強蛋白結(jié)構(gòu)與功能的初步研究王立娟主要內(nèi)容選題背景實驗材料和