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《缺血性腦損傷中ＨＳＰ７２對(duì)神經(jīng)元保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.doc》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、缺血性腦損傷中ＨＳＰ７２對(duì)神經(jīng)元保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究作者：張芳 劉紅芝 張兆成 宋遠(yuǎn)見【摘要】目的探討缺血性腦損傷中HSP72對(duì)大鼠神經(jīng)元的保護(hù)作用及其分子機(jī)制。方法將SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、缺血再灌注對(duì)照組、熱休克處理組、HSP72反義寡核苷酸組及溶劑組。采用焦油紫染色、免疫印跡檢測(cè)大鼠缺血再灌注后海馬神經(jīng)元損傷和腦組織AKT、Bad(Ser136)的磷酸化情況。結(jié)果熱休克處理組與缺血再灌注對(duì)照組、HSP72反義寡核苷酸組和溶劑組相比海馬神經(jīng)元損傷減輕，腦組織AKT和Bad(Ser136)磷酸化升高(P<0．05)。結(jié)論HSP72可能通過升高腦組織中AKT和Bad(Ser136)的
2、磷酸化程度起到海馬神經(jīng)元保護(hù)作用。 【關(guān)鍵詞】缺血性腦損傷；HSP72；AKT；Bad(Ser136) 【Abstract】ObjectiveToinvestigatethemolecularmechanismofneuroprotectionofHSP72duringBraininjuryinducedbyischemia.MethodsSDratsweredividedrandomlyinto5groups:sham-operated;cerebralischemiaandreperfusion;cerebralischemiaandreperfusion+heatshoc
3、ktreatment;cerebralischemiaandreperfusion+antisenseoligonucleotidesandreperfusion+solvent.BraininjuryinhippocampusofratsandchangeofphosphorylationofAKTandbad(ser136)weredetectedbycreslyviolet-strainedorimmunoblotassay.ResultsComparingwithcerebralischemiaandreperfusiongroup,antisenseoligonucleotide
4、sandsolventgroup,thebraininjuryandphosphorylationofAKTandbad(ser136)ofheatshocktreatmentteamincreasedsignificantly.ConclusionHSP72protectedtheneuronsinhippocampusfromischemiabyincreasingphosphorylationofAKTandbad(ser136). 【Keywords】Ischemicbraininjury;HSP72;AKT;Bad(Ser128) 熱休克蛋白（HSPs）因具有細(xì)胞抗氧
5、化保護(hù)作用而成為研究的熱點(diǎn)。高溫能誘導(dǎo)熱休克蛋白合成，HSP72是增強(qiáng)熱耐受力的誘導(dǎo)型HSPs的一種,但是它對(duì)缺血性腦損傷后神經(jīng)元的保護(hù)機(jī)制尚不十分清楚。2008年1月至2008年9月，筆者通過觀察HSP72對(duì)大鼠全腦缺血再灌注損傷后神經(jīng)細(xì)胞凋亡及AKT和Bad(Ser136)磷酸化的影響，以探討其對(duì)大鼠神經(jīng)元的保護(hù)作用及機(jī)制。 1材料與方法 1．1動(dòng)物及分組雄性健康SD大鼠40只，體質(zhì)量250～300g，清潔級(jí)。將大鼠隨機(jī)均分為兩組，缺血15min再灌5d為甲組，再灌12h為乙組。各組又分為假手術(shù)組、缺血再灌注對(duì)照組、熱休克處理組、HSP72反義寡核苷酸組，各5只。 1．2方
6、法 1．2．1動(dòng)物模型制備用20%水合氯醛(300～3504mg/kg)腹腔注射麻醉動(dòng)物后，分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈并電凝椎動(dòng)脈[1-2]。手術(shù)第2天于動(dòng)物清醒狀態(tài)下結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈，使全腦缺血15min，然后不同的時(shí)間再灌注。缺血時(shí)保持其直腸溫度在36．5℃～37．5℃。以缺血?jiǎng)游矬w征表現(xiàn)判斷缺血模型的可靠性。假手術(shù)組的處理同實(shí)驗(yàn)組，但不結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈。熱休克處理組于缺血前2h置于42℃溫箱中熱休克預(yù)處理40min，HSP72反義寡核苷酸組在熱休克預(yù)處理的同時(shí)腹腔注射HSP72反義寡核苷酸0．5ml（5’-TGTTTTCTTGGCCAT-3’,濃度200μmol/L）[3]。 1．2．
7、2樣品制備和免疫印跡甲組于再灌注第5天，以水合氯醛麻醉大鼠，然后以生理鹽水和4%多聚甲醛進(jìn)行心室灌注[1]。取腦組織在4℃多聚甲醛中固定1d以上后，于梯度乙醇溶液中脫水并在二甲苯中透明。包蠟后的腦組織進(jìn)行切片(5μm)，經(jīng)脫蠟、二甲苯，最后放于焦油紫溶液中染色。取海馬CA1區(qū)1mm內(nèi)的細(xì)胞數(shù)量作為計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)。乙組于再灌注12h將大鼠快速斷頭取腦，分離雙側(cè)海馬，置液氮中凍存?zhèn)溆?。以下操作均在冰水浴中進(jìn)行。從液氮中取出海馬，加
