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1、局灶性腦缺血后腦室下區(qū)NMDA受體亞單位NR2B的表達(dá)變化【關(guān)鍵詞】N-甲基-D-天冬氨酸受體;局灶性腦缺血;腦室下區(qū)Abstract:ObjectiveToinvestigatetheexpressionofNMDAreceptorsubunitNR2Binthesubventricularzone(SVZ)afterfocalcerebralischemia.Methods44maleSDratslyassignedto3groups:normalgroup,sham-operationgroupandischemia/
2、reperfusiongroup.Transientbrainischemia(90min)andreperfusioniddlecerebralarteryocclusion(MCAO).BrainsectionscutbyparaffinmethodmunohistochemicalreactionofNR2BbySPmethodandtoevaluatetheresultsageanalysissystem.ResultsSignificantincreaseofNR2Bpositivecellsmunoreactiv
3、ecellsreachedapeakon7d,andthenstartedtodecline.TheexpressionofNR2Bonthecontralateralsidechangedinamannersimilartothatontheischemiaside,butlessinamplitude.ConclusionThepresentresultsdemonstratethatthesharplyincreasedexpressionofNR2BintheSVZmightbeoneoftheeventsinvol
4、vedintheneurogenesisthere.Keyethyl-D-aspartatereceptor;focalcerebralischemia;subventricularzoneN-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受體是哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)谷氨酸受體之一,參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)許多重要的生理和病理過程[1-2]。NMDA受體現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)并克隆的亞單位有NR1、NR2、NR3、NR4[3]。NR1為功能性亞單位;NR2伴隨NR1存在于特定區(qū)域,增強(qiáng)NR1對興奮性氨基酸的反應(yīng),可分為NR2A、NR2B、NR2C、NR2D,其中
5、NR2B亞單位最值得關(guān)注。NR2B不僅存在于神經(jīng)元的突觸上和突觸外,在興奮性突觸傳遞[4]和神經(jīng)元興奮性毒性等方面起重要作用[5];而且還存在于神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs)上[6],影響中樞神經(jīng)發(fā)生[7]。腦室下區(qū)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)重要的神經(jīng)發(fā)生區(qū),以往研究顯示,離體培養(yǎng)的腦室下區(qū)神經(jīng)前體細(xì)胞可對谷氨酸和NMDA的刺激作出反應(yīng)[8],但是在體SVZ區(qū)NMDA受體的表達(dá)影響因素鮮見報道。因此,本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法初步觀察了腦缺血對該區(qū)NR2B表達(dá)的影響,旨在探討腦缺血與NR2B及腦室下區(qū)神經(jīng)發(fā)生之間的關(guān)系,為研究該區(qū)NMDA受體與
6、神經(jīng)發(fā)生的關(guān)系提供一定的理論依據(jù)。1材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)動物及分組健康雄性SD大鼠,體重250~280g,由徐州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供。將動物隨機(jī)分為正常對照組(n=4)、假手術(shù)組和缺血/再灌注組,后2組動物進(jìn)一步分為再灌注后3、7、14、21、28天5個時間點(diǎn),每個時間點(diǎn)每組取4只動物。1.2大鼠大腦中動脈(MCA)缺血/再灌注模型制備采用大鼠大腦MCA阻塞再灌注模型(MCAO-R),參照Nagasam,栓塞90min后回抽出線栓約10mm,即可恢復(fù)MCA血供。手術(shù)過程中常規(guī)檢測肛溫,使肛溫保持在(37.0±0.5)℃。大
7、鼠術(shù)后4h觀察其行為學(xué)變化,按Longa評分標(biāo)準(zhǔn)[10]將動物的行為變化分為5級:0級——行為無明顯變化;1級——左前肢屈曲,左后肢伸展;2級——有左側(cè)追尾現(xiàn)象;3級——行走困難,搖擺不定;4級——意識不清。將1、2、3級動物定為模型成功大鼠,剔除0、4級大鼠。假手術(shù)組大鼠尼龍線插入深度為10mm左右,余同手術(shù)組。而正常組大鼠不作任何手術(shù)處理。1.3NR2B免疫組化反應(yīng)(SP法)各組大鼠在相應(yīng)時間點(diǎn)常規(guī)心內(nèi)灌注,取腦,選取自前囟前1.2mm至前囟后0.3mm含側(cè)腦室的組織塊,石蠟包埋,切片,片厚6μm,每間隔3張取1張貼片,
8、進(jìn)行免疫組化檢測。常規(guī)脫蠟、復(fù)水;微波抗原修復(fù):高火2min,低火15min,自然冷卻至室溫(注:用EDTA抗原修復(fù)液在抗原修復(fù)盒中進(jìn)行);3%H2O2,25min,室溫;10%正常兔血清,37℃,1h(不洗);滴加山羊抗大鼠NR2B抗體(1∶100,SantaCruz公司),4℃72h(