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1、局灶性腦缺血后腦室下區(qū)NMDA受體亞單位NR2B的表達(dá)變化【關(guān)鍵詞】N-甲基-D-天冬氨酸受體；局灶性腦缺血；腦室下區(qū)Abstract:ObjectiveToinvestigatetheexpressionofNMDAreceptorsubunitNR2Binthesubventricularzone（SVZ）afterfocalcerebralischemia.Methods44maleSDratslyassignedto3groups:normalgroup,sham-operationgroupandischemia/
2、reperfusiongroup.Transientbrainischemia(90min)andreperfusioniddlecerebralarteryocclusion(MCAO).BrainsectionscutbyparaffinmethodmunohistochemicalreactionofNR2BbySPmethodandtoevaluatetheresultsageanalysissystem.ResultsSignificantincreaseofNR2Bpositivecellsmunoreactiv
3、ecellsreachedapeakon7d,andthenstartedtodecline.TheexpressionofNR2Bonthecontralateralsidechangedinamannersimilartothatontheischemiaside,butlessinamplitude.ConclusionThepresentresultsdemonstratethatthesharplyincreasedexpressionofNR2BintheSVZmightbeoneoftheeventsinvol
4、vedintheneurogenesisthere.Keyethyl-D-aspartatereceptor;focalcerebralischemia;subventricularzoneN-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受體是哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)谷氨酸受體之一，參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)許多重要的生理和病理過程［1-2］。NMDA受體現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)并克隆的亞單位有NR1、NR2、NR3、NR4［3］。NR1為功能性亞單位；NR2伴隨NR1存在于特定區(qū)域，增強(qiáng)NR1對興奮性氨基酸的反應(yīng)，可分為NR2A、NR2B、NR2C、NR2D，其中
5、NR2B亞單位最值得關(guān)注。NR2B不僅存在于神經(jīng)元的突觸上和突觸外，在興奮性突觸傳遞［4］和神經(jīng)元興奮性毒性等方面起重要作用［5］；而且還存在于神經(jīng)干細(xì)胞（NSCs）上［6］，影響中樞神經(jīng)發(fā)生［7］。腦室下區(qū)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)重要的神經(jīng)發(fā)生區(qū)，以往研究顯示，離體培養(yǎng)的腦室下區(qū)神經(jīng)前體細(xì)胞可對谷氨酸和NMDA的刺激作出反應(yīng)［8］，但是在體SVZ區(qū)NMDA受體的表達(dá)影響因素鮮見報道。因此，本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法初步觀察了腦缺血對該區(qū)NR2B表達(dá)的影響，旨在探討腦缺血與NR2B及腦室下區(qū)神經(jīng)發(fā)生之間的關(guān)系，為研究該區(qū)NMDA受體與
6、神經(jīng)發(fā)生的關(guān)系提供一定的理論依據(jù)。1材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)動物及分組健康雄性SD大鼠，體重250～280g，由徐州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供。將動物隨機(jī)分為正常對照組（n=4）、假手術(shù)組和缺血/再灌注組，后2組動物進(jìn)一步分為再灌注后3、7、14、21、28天5個時間點(diǎn)，每個時間點(diǎn)每組取4只動物。1.2大鼠大腦中動脈（MCA）缺血/再灌注模型制備采用大鼠大腦MCA阻塞再灌注模型（MCAO-R），參照Nagasam,栓塞90min后回抽出線栓約10mm，即可恢復(fù)MCA血供。手術(shù)過程中常規(guī)檢測肛溫，使肛溫保持在(37.0±0.5)℃。大
7、鼠術(shù)后4h觀察其行為學(xué)變化，按Longa評分標(biāo)準(zhǔn)［10］將動物的行為變化分為5級：0級——行為無明顯變化；1級——左前肢屈曲，左后肢伸展；2級——有左側(cè)追尾現(xiàn)象；3級——行走困難，搖擺不定；4級——意識不清。將1、2、3級動物定為模型成功大鼠，剔除0、4級大鼠。假手術(shù)組大鼠尼龍線插入深度為10mm左右，余同手術(shù)組。而正常組大鼠不作任何手術(shù)處理。1.3NR2B免疫組化反應(yīng)（SP法）各組大鼠在相應(yīng)時間點(diǎn)常規(guī)心內(nèi)灌注，取腦，選取自前囟前1.2mm至前囟后0.3mm含側(cè)腦室的組織塊，石蠟包埋，切片，片厚6μm，每間隔3張取1張貼片，
8、進(jìn)行免疫組化檢測。常規(guī)脫蠟、復(fù)水；微波抗原修復(fù)：高火2min，低火15min，自然冷卻至室溫（注：用EDTA抗原修復(fù)液在抗原修復(fù)盒中進(jìn)行）；3％H2O2，25min，室溫；10％正常兔血清，37℃，1h（不洗）；滴加山羊抗大鼠NR2B抗體（1∶100，SantaCruz公司），4℃72h（
