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《離體培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞中NMDA受體亞單位NR2B的表達(dá).doc》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、離體培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞中NMDA受體亞單位NR2B的表達(dá)作者：胡忠浩，王珊珊，徐鐵軍【關(guān)鍵詞】神經(jīng)干細(xì)胞;NMDA受體亞單位2B;Western,blot摘要：目的研究離體培養(yǎng)的大鼠神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs)中N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受體亞單位NR2B的表達(dá)。方法從孕18?19天胎鼠海馬中分離、培養(yǎng)、傳代、鑒定NSCs,用免疫細(xì)胞化學(xué)、Westernblot免疫印跡檢測(cè)傳代1次NSCs中NMDA受體亞單位NR2B的表達(dá)。結(jié)果源自孕18?19天胎鼠海馬的NSCs,即可以表達(dá)NM-DA受體亞單位NR2B。結(jié)論體外培養(yǎng)的NSCs能表達(dá)NMDA受體亞單位NR2Bo關(guān)鍵
2、詞：神經(jīng)干細(xì)胞;NMDA受體亞單位2B;WesternblotAbstract:Object!veToinvestigatetheexpressionofNMDAreceptorsubunit2Bintheculturedneuralstemcells(NSCs)?MethodsNSCsfromthehippocampusofratsatembryonicdayl8-19wereisolated,cultured,passagedandidenti-fied?TheexpressionofN-methyl-D-aspartate(NMDA)receptorsub
3、unit2BinthepassagedNSCswasdeterminedbyim-niunocytochemistryandWesternblot?ResultsItwasfoundthatNSCsderivedfromthehippocampusofratsatembryonicdayl8-19couldexpressNMDAreceptorsubunit2B.ConclusionNSCscanexpressNMDAreceptorsubunit2Binvitro.Keywords:neuralstemcells;NMDAreceptorsubunit2B;W
4、esternblot自20世紀(jì)90年代以來，人們相繼從哺乳動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)，特別是成年人腦腦室周圍的室管膜下層、齒狀回顆粒下層、紋狀體等部位分離培養(yǎng)出神經(jīng)干細(xì)胞[]](neuralstemcells,NSCs)。NSCs的生長(zhǎng)及分化與多種神經(jīng)生長(zhǎng)因子和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子有關(guān)，其中谷氨酸及其受體起著重要的作用。谷氨酸是體內(nèi)一種主要的興奮性氨基酸，它的過度釋放可通過NMDA受體導(dǎo)致神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的死亡[2]o已有研究表明，在體外培養(yǎng)的神經(jīng)元上表達(dá)N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受體[3],那么NSCs是否表達(dá)NMDA受體，其對(duì)細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生何種影響述不是很清楚。本實(shí)
5、驗(yàn)初步研究了NSCs±NR2B的蛋白質(zhì)的表達(dá)。1材料和方法1.1材料孕18~19天SD(Sprague-Dawley)大鼠由徐州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1?2主要試劑和儀器細(xì)胞培養(yǎng)試劑高糖DMEM.F12(1：1)、B27、重組人堿性成纖維生長(zhǎng)因子(h-bF-GF)、垂組人表皮生長(zhǎng)因子(h-EGF)均購(gòu)自Gibco公司?？贵w為：神經(jīng)上皮干細(xì)胞蛋白(nestin)單克隆抗體(Sigma公司)、膠質(zhì)原纖維酸性蛋口(GFAP)單克隆抗體(Sigma公司)、BTTI型微管蛋白(B-TTItubu-lin)單克隆抗體(Sigma公司)、山羊抗NR2B多克隆抗體（Santa
6、Cruz公司）、生物素標(biāo)記兔抗山羊IgG和羊抗小鼠TgG（北京中杉生物試劑公司）、堿性磷酸酶標(biāo)記兔抗山羊IgG（北京中杉生物試劑公司）、兔抗山羊FITC-IgG（JacksonlmmonoResearch公司）、山羊抗鼠TRITC-IgG（JacksonTmmonoResearch公司）、山羊抗鼠FTTC-TgG（JacksonlmmonoResearch公司）。DAB（北京中杉生物試劑公司）,多聚賴氨酸（Sigma公司），胎牛血清（FBS,杭州四季青生物試劑公司）。儀器:C02培養(yǎng)箱（Thermo,美國(guó)），熒光倒置相差顯微鏡（01ympusIX70,日本）,M
7、ini-PR0TEAN3Cell（BIORAD,美國(guó)），分光光度計(jì)（722N,上海），低溫■高速離心機(jī)（Eppendorf,德國(guó)），蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)膜儀（BTORAD公司）。1.3方法1.3.1大鼠胚胎NSCs的分離培養(yǎng)取孕18?19天大鼠，麻醉后處死，消毒取胎鼠，將胎鼠置于0.5%碘伏中消毒，取腦，分離海馬，置于盛有少量高糖DMEM.F12基礎(chǔ)培養(yǎng)液的培養(yǎng)皿中；將組織盡量剪碎，加入基礎(chǔ)培養(yǎng)液5ml,吹打制成細(xì)胞懸液，400目篩網(wǎng)過濾，臺(tái)盼藍(lán)染色，細(xì)胞計(jì)數(shù)，以2X109個(gè)細(xì)胞?L接種到6孔培養(yǎng)板內(nèi)，最后加入h-EGF（20ug.L）和h-bFGF（20ug.L）,置37
8、°C、5%C02、95%
