第十章抗原和抗體的制備與應(yīng)用_ppt課件

《第十章抗原和抗體的制備與應(yīng)用_ppt課件》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。

1、第十章抗原和抗體的制備與應(yīng)用抗原——是指能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生（特異性）免疫應(yīng)答，并能與免疫應(yīng)答產(chǎn)物抗體和致敏淋巴細(xì)胞在體內(nèi)外結(jié)合，發(fā)生免疫效應(yīng)（特異性反應(yīng)）的物質(zhì)?？乖幕咎匦裕孩僬T導(dǎo)免疫應(yīng)答的能力，即免疫原性。②與免疫應(yīng)答的產(chǎn)物發(fā)生反應(yīng)，即抗原性（免疫反應(yīng)性）。免疫原——具有免疫原性的物質(zhì)免疫原性的化學(xué)基礎(chǔ)化學(xué)組成分子量化學(xué)結(jié)構(gòu)大分子蛋白、多糖等﹥10000具有免疫原性；4000﹤免疫原﹤10000呈弱免疫原性；4000﹤一般不具有免疫原性。一般而言，分子結(jié)構(gòu)和空間結(jié)構(gòu)愈復(fù)雜的物質(zhì)免疫原性愈強(qiáng)人工抗原人工抗原：用化學(xué)合成法或基因重組法制備含有已知化學(xué)結(jié)構(gòu)決定簇

2、的抗原，稱之為人工抗原。①人工結(jié)合抗原：將無(wú)免疫原性的簡(jiǎn)單化學(xué)基團(tuán)與蛋白質(zhì)載體偶聯(lián)，或?qū)o(wú)免疫原性的有機(jī)分子如二硝基苯（DNP）或三硝基苯（TNP）與蛋白質(zhì)載體結(jié)合，形成載體-半抗原結(jié)合物，均屬人工結(jié)合抗原。②人工合成抗原：用化學(xué)方法將活化氨基酸聚合，使之成為合成多肽。只由一種氨基酸形成的聚合體稱為同聚多肽，如由左旋賴氨酸形成的共同聚多肽（PLL）。③基因工程抗原：將編碼免疫原性氨基酸序列的基因克隆化并與適當(dāng)載體（如細(xì)菌?；虿《荆〥NA分子相結(jié)合，然后引入受體細(xì)胞中（如原核細(xì)胞的大腸桿菌或真核細(xì)胞酵母菌及哺乳類(lèi)動(dòng)物細(xì)胞）使之表達(dá)，即能獲得免疫原性之融合蛋白，經(jīng)

3、純化后可做為疫苗，此即基因工程疫苗。人工結(jié)合抗原半抗原：能與對(duì)應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)抗原-抗體反應(yīng)、又不能單獨(dú)激發(fā)人或動(dòng)物體產(chǎn)生抗體的抗原。它只有反應(yīng)原性，不具免疫原性，又稱不完全抗原。一些比一般半抗原分子量小，但有特異結(jié)構(gòu)的化學(xué)活性基團(tuán)物質(zhì)（如青霉素、磺胺劑等），稱為簡(jiǎn)單半抗原。載體蛋白：制作人工結(jié)合抗原時(shí)與半抗原進(jìn)行偶聯(lián)的具有免疫原性的生物大分子，主要為大分子的蛋白質(zhì)。如：牛血清白蛋白(BSA)。載體蛋白半抗原偶聯(lián)橋人工抗原合成常用的載體載體表面應(yīng)首先應(yīng)具有化學(xué)活性基團(tuán)。載體應(yīng)具備一定的容量，可以偶聯(lián)足夠的分子。載體應(yīng)該是惰性的，不應(yīng)干擾偶聯(lián)分子的功能。載體應(yīng)具有

4、足夠的穩(wěn)定性，且應(yīng)該是廉價(jià)易得的。牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、鑰孔血藍(lán)蛋白(KLH)、人血清白蛋白(HSA)及人工合成的多聚賴氨酸(PLL)等是常用的載體蛋白。載體的特點(diǎn)Ag單克隆抗體B1B2B3B4B3B3B3B32多克隆抗體3411、單克隆抗體的特點(diǎn)特異性強(qiáng)，具有抗原結(jié)合位點(diǎn)的專一性。（不是抗原的專一性?。┮蚪Y(jié)合位點(diǎn)的單一性，有時(shí)不易捕捉抗原，一株單克隆抗體與抗原不易產(chǎn)生凝集反應(yīng)或沉淀反應(yīng)?？贵w的性質(zhì)相同，容易純化、標(biāo)記。單克隆抗體有交叉反應(yīng)是由于不同的抗原上有完全相同的表位（100%的交叉反應(yīng)）,或有相似的表位（不同程度的交叉反應(yīng)）。2、

5、多克隆抗體的特點(diǎn)多抗是單抗的混合物，因此多抗的性質(zhì)是一個(gè)群體綜合的性質(zhì)。特異性一般比單抗差因?yàn)橛刹煌再|(zhì)的抗體組成，只要其中含交叉反應(yīng)的抗體，多抗就有交叉反應(yīng)，所以多抗更容易有交叉反應(yīng)。比單抗更容易捕捉抗原。因?yàn)楹锌共煌砦坏目贵w，多種抗體都可與抗原結(jié)合?？贵w的純化、標(biāo)記比單抗難因?yàn)楹懈鞣N不同類(lèi)型、亞類(lèi)的抗體，提純、標(biāo)記的方法有所差別。同時(shí),血清中含有的雜蛋白比較多.二、抗體的制備1、單克隆抗體的制備無(wú)法采用生物化學(xué)的方法從多抗中分離必須采用細(xì)胞雜交的方法來(lái)制備能否篩選到理想的單克隆抗體有技術(shù)問(wèn)題也有機(jī)遇問(wèn)題制備單克隆抗體的基本原理：致敏的B淋巴細(xì)胞骨

6、髓瘤細(xì)胞（myeloma）（能夠分泌特異性的抗體，（不能分泌特異性的抗體，不能在體外長(zhǎng)期生存）但能在體外長(zhǎng)期生存）陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞(hybridoma)（既能分泌特異性抗體，又能夠在體外長(zhǎng)期生存）克隆化培養(yǎng)（產(chǎn)生單克隆的陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞）生產(chǎn)單克隆抗體1222212單抗與多抗的區(qū)別單抗多抗抗體組成單一復(fù)雜抗體性質(zhì)個(gè)體的屬性群體綜合的性質(zhì)純化標(biāo)記容易，效果好難度高一些種屬來(lái)源絕大多數(shù)是小鼠兔子、羊、豚鼠等制備周期長(zhǎng)(最短4個(gè)月）短（2個(gè)月）制備技術(shù)復(fù)雜簡(jiǎn)單經(jīng)費(fèi)多少