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1、蓮心堿對大鼠局灶性腦缺血C余萬桂陳庭煊張恒文謝平張燕祥張道明劉蓮鄧德明【關(guān)鍵詞】蓮心堿;,,腦缺血;,,C 摘要:目的觀察蓮心堿對大鼠局灶性腦缺血CFos蛋白表達(dá)的影響并探討其保護(hù)作用機(jī)制。方法采用線栓法制備大鼠局灶性腦缺血模型,通過免疫組化法檢測腦缺血24hCFos蛋白的表達(dá)以及經(jīng)蓮心堿(3mg/kg)處理后對該蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果腦缺血24hCFos蛋白的表達(dá)明顯增加,蓮心堿可顯著抑制腦缺血后CFos蛋白表達(dá)。結(jié)論蓮心堿的神經(jīng)保護(hù)機(jī)制可能與抑制CFos蛋白的表達(dá)有關(guān)?! £P(guān)鍵詞:蓮心堿;腦缺血;CFos蛋白 Abstract:ObjectiveTo
2、observetheeffectofliensinineonCFosproteinexpressioninRatsiaandinvestigateitsprotectivemechanism.MethodsThemodeloffocalcerebralischemiainratsadebysuture-occludedmethod,theexpressionofCFOSproteinandtheeffectofLiensinine(3mg/kg)appliedpriorischemiaontheexpressionmunohistochemicalmetho
3、daftercerebralischemia24h.ResultsTheexpressionofCFOSproteinsignificantlyincreasedafter24hischemiaandLiensininesignificantlyinhibitedtheexpressionofCFos.ConclusionTheprotectivemechanismofLiensinineisprobablyrelatedtotheinhibitionofCFOSgeneexpression. Keyia;CFosProtein CFos蛋白是凋亡相關(guān)基
4、因C-Fos的表達(dá)產(chǎn)物,對缺血反應(yīng)敏感,可作為研究腦缺血后藥物干預(yù)的指標(biāo)〔1〕。蓮心堿是從中藥蓮子心中提取分離得到的雙芐基異喹啉類化合物,具有降壓、抗心律失常等心血管活性〔2〕,文獻(xiàn)報(bào)道與蓮心堿同屬蓮子心主成分的另一生物堿─異蓮心堿對實(shí)驗(yàn)性腦缺血損傷具有保護(hù)作用〔3〕,同時(shí)我們在實(shí)驗(yàn)中觀察到蓮心堿對腦缺血具有保護(hù)作用,但其作用機(jī)制未明。本研究通過觀察蓮心堿對局灶性腦缺血CFos蛋白表達(dá)的影響,探討其對大鼠局灶性缺血性保護(hù)作用的機(jī)制。 1材料 1.1動物雄性SD大鼠24只,體重200~240g,由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供(動物中心許可證號為S
5、YXK(鄂)20040028,動物合格證號為SCXK(鄂)20040007)。 1.2藥物與試劑蓮心堿由武漢大學(xué)藥學(xué)院藥物化學(xué)研究室提供。免疫組化試劑,兔抗CFos抗體和生物素化羊抗兔IgG購自武漢博士德公司,抗體效價(jià)1∶100。 1.3儀器切片機(jī),LeicaDMLB2顯微鏡和LeicaMPS60顯微照像系統(tǒng)(德國Leica公司)?! ?方法 2.1動物模型制備與分組24只雄性SD大鼠隨機(jī)分為3組,分別為假手術(shù)組、缺血組、蓮心堿組。參考ZeaLonga等〔4〕的方法,并稍加改良制備大腦中動脈局灶缺血模型。3組大鼠分別予以戊巴比妥鈉30mg/kg,腹腔注
6、射麻醉,頸部正中切口,暴露右側(cè)頸總動脈(CCA)和頸外動脈(ECA),5/0絲線結(jié)扎頸外動脈,分離與頸總動脈伴行的迷走神經(jīng),在距頸總動脈分叉處近端0.5~0.6cm處結(jié)扎頸總動脈,在結(jié)扎線的遠(yuǎn)端,置絲線備用,用微小動脈夾夾閉備用線遠(yuǎn)端的頸總動脈,在備用線的近端用4號半頭皮針扎一小孔,將作標(biāo)記5/0尼龍線栓送入切口,向上推至動脈夾處,將備用線扎緊,隨即松開動脈夾,缺血組和蓮心堿組將線栓沿頸總動脈、頸內(nèi)動脈順行向上插入至MCA起始部,遇阻力時(shí)停止,從頸總動脈分叉處計(jì)算插入深度1.7~1.9cm,造成大腦中動脈血供阻斷。而假手術(shù)組將線栓沿頸總動脈、頸內(nèi)動脈順行向上
7、插入,插入深度僅為1cm,其余步驟同上。手術(shù)結(jié)束后蓮心堿組舌靜脈注射蓮心堿3mg?kg1,缺血組舌靜脈注射同等劑量生理鹽水,假手術(shù)組不給于處理?! ?.2腦缺血體積的測量24h大鼠斷頭取腦,去除嗅球、小腦及低位腦干后,腦組織放于-20℃冰箱中,冷凍20min,取出后間隔3mm連續(xù)做冠狀切片,置于1%TTC磷酸緩沖液中,37℃下恒溫避光孵育30min,正常組織染成紅色,梗塞灶染成白色,腦片置4%多聚甲醛固定,數(shù)碼相機(jī)拍照,多媒體彩色病理圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行處理,計(jì)算出大鼠的梗死灶體積和體積百分比?! ?.3CFos的免疫組化染色缺血24h后以過量的戊巴比妥(50~
8、100mg/kg)腹腔注射麻醉,開胸左心室插管,灌注