增齡對(duì)大鼠局灶性腦缺血-再灌注損傷的影響

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1、增齡對(duì)大鼠局灶性腦缺血/再灌注損傷的影響作者：杜斌邱麗穎李英范紅斌程建青【摘要】目的觀察增齡對(duì)大鼠局灶性腦缺血/再灌注損傷(CI/RI)的影響。方法應(yīng)用線(xiàn)栓的方法，對(duì)10、16周齡的雄性SD大鼠作局部腦缺血2h、再灌24h模型,觀察增齡對(duì)大鼠神經(jīng)癥狀缺失評(píng)分、腦損傷面積、病理形態(tài)、腦組織乳酸(LD)、乳酸脫氫酶(LDH)及血清中LDH和肌酸激酶(CK)的影響。結(jié)果CI/RI24h,兩個(gè)年齡組神經(jīng)癥狀缺失評(píng)分及腦損傷面積明顯增大，病理形態(tài)改變嚴(yán)重、腦組織LD及LDH明顯下降，血清中LDH和CK明顯升高，以16周齡更為嚴(yán)重。結(jié)論CI

2、/RI隨年齡增長(zhǎng)損傷程度增加，可能與腦的老齡化相關(guān)?！娟P(guān)鍵詞】增齡;腦缺血/再灌注損傷;大鼠腦缺血/再灌注損傷(CI/RI)導(dǎo)致的急性腦損傷，嚴(yán)重影響患者的預(yù)后和功能恢復(fù)。對(duì)于這個(gè)復(fù)雜多環(huán)節(jié)病理過(guò)程，其病情的發(fā)展和轉(zhuǎn)歸尚不明確。本文旨在通過(guò)研究不同年齡組大鼠局灶性CI/RI時(shí)腦損傷的改變，了解年齡對(duì)CI/RI的影響?！　?材料與方法　　1.1藥品和試劑氯化三苯基四氮唑(TTC)(上海化學(xué)試劑公司),磷酸鹽緩沖液配制,避光低溫貯存;生化試劑盒(購(gòu)自南京建成生物工程研究所);其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。　　1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組雄性SD大

3、鼠，由中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物編號(hào)為SCXK(滬)20070005。其中10周齡大鼠體重(190±20)g;16周齡大鼠體重(260±20)g。不同年齡組大鼠分別分為假手術(shù)組、CI/RI模型組。術(shù)前12h禁食,自由飲水?！　?.3模型制備用直徑0.205mm尼龍線(xiàn)作栓子,參照Longa等〔1〕腔內(nèi)線(xiàn)栓法制作右側(cè)大腦中動(dòng)脈栓塞(MCAO)模型。局部腦缺血2h、拔出線(xiàn)栓行再灌24h?！　?.4神經(jīng)癥狀缺失評(píng)分按5分制評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，術(shù)后評(píng)1～3分者為手術(shù)成功標(biāo)志;0分：無(wú)明顯神經(jīng)病學(xué)癥狀;1分：不能完全伸展左前肢;2分：向左

4、側(cè)旋轉(zhuǎn);3分行走時(shí)向左側(cè)傾斜;4分：不能自行行走。　　1.5腦損傷范圍測(cè)定再灌24h時(shí)迅速斷頭取腦，4刀5分法沿冠狀切面切片，2%TTC染色后，正常組織呈紅色，損傷組織呈白色。CAD計(jì)算機(jī)軟件計(jì)算損傷面積，以占雙側(cè)大腦半球面積的百分比作為損傷面積〔2〕。　　1.6病理形態(tài)改變?nèi)∫暯徊嬷谅┒繁哪X冠狀切片，置10%福爾馬林中固定，常規(guī)脫水、透明、浸蠟、包埋等步驟，5μm腦組織冠狀切片作HE染色，觀察腦形態(tài)學(xué)變化。　　1.7腦組織LD、LDH的活性測(cè)定取腦組織與生理鹽水制成10%組織勻獎(jiǎng)，3500r/min離心10min。取上清于-

5、20℃保存?zhèn)溆?。LD及LDH的測(cè)定嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。　　1.8血清LDH、CK的活性測(cè)定再灌24h時(shí)迅速斷頭取血，分離血清樣本,LDH、CK的測(cè)定嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。　　1.9統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x±s表示,組間差異用t檢驗(yàn)?！　?結(jié)果　　2.1各組大鼠神經(jīng)癥狀缺失評(píng)分與假手術(shù)組比較，10周齡CI/RI組與16周齡CI/RI組的大鼠均表現(xiàn)不同程度的神經(jīng)癥狀缺失(P<0.01)。與10周齡CI/RI組比較，16周齡CI/RI組神經(jīng)癥狀缺失明顯嚴(yán)重(P<0.01)，見(jiàn)表1。表1CI/RI時(shí)神經(jīng)癥狀缺失評(píng)分、腦損傷面

6、積的變化1)與同周齡假手術(shù)組比較，2)與10周齡CI/RI組比較：P<0.01，下表同　　2.2各組大鼠腦損傷范圍變化與10周齡CI/RI組比較，16周齡CI/RI組腦損傷面積擴(kuò)大(P<0.01)，(見(jiàn)表1，圖1)?！　?.3各組大鼠病理形態(tài)學(xué)的改變假手術(shù)組，皮層神經(jīng)細(xì)胞排列整齊，分布均勻，層次清楚，大小一致，胞膜完整，胞漿均勻，核膜清楚，染色質(zhì)顆粒細(xì)小均勻，有一小核仁。10周齡CI/RI組，大腦皮質(zhì)部分細(xì)胞消失，數(shù)目減少，排列紊亂，星形膠質(zhì)細(xì)胞增生，胞核深染，形態(tài)大小不一，血管周?chē)霈F(xiàn)空暈，間質(zhì)疏松。16周齡CI/

7、RI組，大腦皮質(zhì)部分細(xì)胞消失，數(shù)目減少，排列紊亂，細(xì)胞體積大小不一，形態(tài)不規(guī)則，有呈三角形、菱形和不規(guī)則形，胞核深染，大小形態(tài)不一，核膜不清，核仁不明顯。中心區(qū)域出現(xiàn)壞死;星形膠質(zhì)細(xì)胞增生，膠質(zhì)結(jié)節(jié)形成，血管擴(kuò)張充血，其周?chē)霈F(xiàn)空暈，間質(zhì)疏松，呈網(wǎng)狀改變等。見(jiàn)圖2?！　?.4各組大鼠腦組織LD、LDH含量變化與同周齡假手術(shù)組比較，10周齡CI/RI組LD、LDH水平顯著降低(P<0.01)，16周齡CI/RI組LD、LDH水平顯著低于10周齡CI/RI組(P<0.01)(表2)。　　2.5各組大鼠血清CK、LDH含量

8、的變化與同周齡假手術(shù)組比較，CI/RI組CK、LDH含量顯著升高(P<0.01)。16周齡CI/RI組血清中的CK、LDH含量明顯高于10周齡CI/RI組(P<0.01)(表3)。表2CIRI時(shí)大鼠腦組織中LD、LDH的變化表3CIRI時(shí)大鼠血清中C