麥芽醇對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后inos的影響論文

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1、麥芽醇對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后iNOS的影響論文【摘要】目的觀察麥芽醇對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)的影響。方法建立大鼠大腦中動(dòng)脈阻塞(MCAO)再灌流模型，應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測腦組織中iNOS的表達(dá)。結(jié)果腦缺血再灌注損傷后，腦組織中iNOS表達(dá)明顯增強(qiáng)，給予麥芽醇后，iNOS表達(dá)減弱。結(jié)論麥芽醇可抑制iNOS表達(dá)，對腦缺血再灌注損傷有保護(hù)作用?！娟P(guān)鍵詞】麥芽醇;腦缺血;再灌注損傷;誘導(dǎo)型一氧化氮合酶ABSTRACT：ObjectiveToinvestigatetheeffectsofmaltolon

2、theexpressionofiNOSafterfocalcerebralischemiareperfusioninjuryinrats.MethodsThemodelofischemiareperfusioninjuryiddlecerebralarteryocclusion(MCAO).TheexpressionofiNOSmunohistochemistry.ResultsTheexpressionofiNOSiareperfusion.Treatmentaltolcouldmarkedlyinhibittheexpressionof

3、iNOS.ConclusionmaltolmayprotectcerebralischemiareperfusioninjurybyreducingtheexpressionofiNOS.KEYaltol;Cerebralischemia;Reperfusioninjury;Induciblenitricoxidesynthase目前已經(jīng)確定的一氧化氮合酶亞型有3種，分別稱為神經(jīng)元型NOS(neuronalNOS,nNOS)、誘導(dǎo)型NOS(inducibleNOS,iNOS)和內(nèi)皮型NOS(endotheialNOS,eNOS)。腦缺血再灌

4、注損傷后NOS活性明顯增加，加重局灶性腦缺血損傷1。麥芽醇是從紅參中提取的單體化合物.freeli等4方法制作大鼠左側(cè)大腦中動(dòng)脈阻塞及再灌流模型。采用10%水合氯醛(0.3ml/100g)麻醉,術(shù)中維持動(dòng)物肛溫(36.6±0.5)℃，頸部正中切口，分離并結(jié)扎左側(cè)頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈,注意避免刺激迷走神經(jīng)。從頸總動(dòng)脈分叉處插入4.0絲線,沿頸內(nèi)動(dòng)脈進(jìn)入距頸總動(dòng)脈分叉處1.8～2.0cm略感阻力時(shí)停止;30min后拔出絲線進(jìn)行缺血再灌注。術(shù)后在約20℃的空調(diào)環(huán)境下單籠飼養(yǎng),自由進(jìn)食、進(jìn)水。對照組只暴露血管。1.3麥芽醇給藥參考有關(guān)文獻(xiàn)5，麥芽醇組

5、分別在缺血前和缺血后30min經(jīng)尾靜脈注射2ml700μmol/L麥芽醇生理鹽水。1.4免疫組化檢測iNOS的表達(dá)大鼠在腦缺血30min再灌注24h后經(jīng)水合氯醛腹腔麻醉，開胸經(jīng)主動(dòng)脈插管，剪開右心房，以200ml生理鹽水經(jīng)升主動(dòng)脈快速?zèng)_洗。隨后灌注冷的(4℃)4%多聚甲醛固定液350ml，開顱取出全腦，修塊保留缺血中心區(qū)(前囟后1.8mm)后固定于相同固定液中6h，入25%蔗糖至組織塊下沉。AO恒冷箱切片機(jī)連續(xù)冠狀切片，片厚20μm。對腦組織冰凍切片進(jìn)行iNOS表達(dá)的檢測，蒸餾水新鮮配置3%H2O2，室溫浸泡5～10min以滅活內(nèi)源性酶，滴

6、加正常山羊血清30min，不洗，甩去多余液體;滴加兔抗鼠iNOS一抗(1∶400，北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)，室溫下(25℃)孵育2h，然后在4℃下過夜，PBS洗;滴加生物素化山羊抗兔IgG(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司,二抗試劑盒)室溫下30min，PBS洗;滴加辣根酶標(biāo)記的鏈酶卵白素稀釋液,室溫孵育45min，PBS洗10min×3次;DAB顯色，室溫下15min，雙蒸水多次洗滌;脫水、透明，中性樹膠封片。顯微鏡下觀察，陽性細(xì)胞呈棕黃色顆粒。1.5圖像分析和統(tǒng)計(jì)學(xué)處理每組動(dòng)物取10張切片，每張切片選取左右皮層，用HPIAS100高

7、清晰度彩色圖文分析系統(tǒng)對其免疫反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行吸光度測定。所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)輸入計(jì)算機(jī)用SPAS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，并以方差分析，P0.05為差異顯著性標(biāo)準(zhǔn)。2結(jié)果iNOS免疫反應(yīng)反應(yīng)產(chǎn)物為棕褐色顆粒或點(diǎn)狀，分布于胞漿。缺血再灌注組iNOS在皮層和海馬大量表達(dá)，與正常對照組相比染色明顯加深。麥芽醇組iNOS在皮層和海馬陽性表達(dá)與缺血再灌注組比較染色明顯減弱。(圖1)對各組大鼠皮層經(jīng)HPIAS100高清晰度彩色病理圖文分析系統(tǒng)測定其吸光度，并經(jīng)包于該系統(tǒng)內(nèi)的統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理(方差分析)，定量分析結(jié)果顯示：缺血再灌注組iN

8、OS在皮層和海馬的吸光度較正常對照組相同腦區(qū)顯著上升(P0.05);麥芽醇組在皮層和海馬吸光度較缺血再灌注組顯著降低(P0.05)。(表1)3討論NO是一種自由性質(zhì)的氣體，為較小