麥芽醇對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后inos的影響

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1、麥芽醇對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后iNOS的影響　　ABSTRACT：ObjectiveToinvestigatetheeffectsofmaltolontheexpressionofiNOSafterfocalcerebralischemiareperfusioninjuryinrats.MethodsThemodelofischemiareperfusioninjuryiddlecerebralarteryocclusion(MCAO).TheexpressionofiNOSmunohistochemistry.ResultsTheex

2、pressionofiNOSiareperfusion.TreatmentaltolcouldmarkedlyinhibittheexpressionofiNOS.ConclusionmaltolmayprotectcerebralischemiareperfusioninjurybyreducingtheexpressionofiNOS.　　KEYaltol;Cerebralischemia;Reperfusioninjury;Induciblenitricoxidesynthase　　目前已經(jīng)確定的一氧化氮合酶亞型有3種，分別稱為神經(jīng)元型

3、NOS(neuronalNOS,nNOS)、誘導(dǎo)型NOS(inducibleNOS,iNOS)和內(nèi)皮型NOS(endotheialNOS,eNOS)。腦缺血再灌注損傷后NOS活性明顯增加，加重局灶性腦缺血損傷[1]。麥芽醇是從紅參中提取的單體化合物，其在體內(nèi)外可與自由基結(jié)合，對腦缺血再灌注損傷有保護作用[2，3]。為了深入研究麥芽醇抗腦缺血的機制，我們觀察了麥芽醇對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后iNOS的影響?！　?材料與方法　　1.1試驗動物和分組　　成年健康雄性SD大鼠36只，體質(zhì)量230～280g，清潔級，武漢大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院試驗動物中心提

4、供。隨機分為對照組、缺血再灌注組和麥芽醇組，每組12只?！　?.2大腦中動脈閉塞(MCAO)再灌注模型的建立　　參照Koizumi等[4]方法制作大鼠左側(cè)大腦中動脈阻塞及再灌流模型。采用10%水合氯醛(0.3ml/100g)麻醉,術(shù)中維持動物肛溫(36.6±0.5)℃，頸部正中切口，分離并結(jié)扎左側(cè)頸總動脈、頸外動脈,注意避免刺激迷走神經(jīng)。從頸總動脈分叉處插入4.0絲線,沿頸內(nèi)動脈進入距頸總動脈分叉處1.8～2.0cm略感阻力時停止;30min后拔出絲線進行缺血再灌注。術(shù)后在約20℃的空調(diào)環(huán)境下單籠飼養(yǎng),自由進食、進水。對照組只暴露血管?！　?

5、.3麥芽醇給藥　　參考有關(guān)文獻[5]，麥芽醇組分別在缺血前和缺血后30min經(jīng)尾靜脈注射2ml700μmol/L麥芽醇生理鹽水?！　?.4免疫組化檢測iNOS的表達　　大鼠在腦缺血30min再灌注24h后經(jīng)水合氯醛腹腔麻醉，開胸經(jīng)主動脈插管，剪開右心房，以200ml生理鹽水經(jīng)升主動脈快速沖洗。隨后灌注冷的(4℃)4%多聚甲醛固定液350ml，開顱取出全腦，修塊保留缺血中心區(qū)(前囟后1.8mm)后固定于相同固定液中6h，入25%蔗糖至組織塊下沉。AO恒冷箱切片機連續(xù)冠狀切片，片厚20μm。對腦組織冰凍切片進行iNOS表達的檢測，蒸餾水新鮮配置3

6、%H2O2，室溫浸泡5～10min以滅活內(nèi)源性酶，滴加正常山羊血清30min，不洗，甩去多余液體;滴加兔抗鼠iNOS一抗(1∶400，北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)，室溫下(25℃)孵育2h，然后在4℃下過夜，PBS洗;滴加生物素化山羊抗兔IgG(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司,二抗試劑盒)室溫下30min，PBS洗;滴加辣根酶標(biāo)記的鏈酶卵白素稀釋液,室溫孵育45min，PBS洗10min×3次;DAB顯色，室溫下15min，雙蒸水多次洗滌;脫水、透明，中性樹膠封片。顯微鏡下觀察，陽性細胞呈棕黃色顆粒?！　Ω鹘M大鼠皮層經(jīng)HPIAS100高清

7、晰度彩色病理圖文分析系統(tǒng)測定其吸光度，并經(jīng)包于該系統(tǒng)內(nèi)的統(tǒng)計學(xué)軟件處理(方差分析)，定量分析結(jié)果顯示：缺血再灌注組iNOS在皮層和海馬的吸光度較正常對照組相同腦區(qū)顯著上升(P<0.05);麥芽醇組在皮層和海馬吸光度較缺血再灌注組顯著降低(P<0.05)。(表1)　　3討論　　NO是一種自由性質(zhì)的氣體，為較小的生物活性分子，可自由穿過細胞膜，作用于細胞內(nèi)的靶分子。機體內(nèi)NO過量的生成可直接抑制有關(guān)酶的活性,可與超氧化物歧化物結(jié)合導(dǎo)致細胞的損傷[6，7]。有研究表明NO在腦缺血性損傷發(fā)病中起重要作用，缺血后數(shù)分鐘NO含量明顯增高，之后

8、緩慢下降，于再灌注期NO再次升高[5]。NOS是NO合成中的關(guān)健調(diào)節(jié)因素，體內(nèi)NO的含量及生物學(xué)作用完全依賴于NOS的活性。NOS活性的升高伴隨著NO含量的增加。在