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《硫化氫對(duì)大鼠局灶性腦缺血腦線粒體損傷的影響》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文硫化氫對(duì)大鼠局灶性腦缺血腦線粒體損傷的影響姓名:駱海坤申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專(zhuān)業(yè):藥理學(xué)指導(dǎo)教師:張建新201203中文摘要硫化氫對(duì)大鼠局灶性腦缺血腦線粒體損傷的影響摘要腦缺血疾病是目前嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的主要疾病之一,具有發(fā)病率高、致殘率高、死亡率高的特點(diǎn)。腦缺血后引起一系列病理生理方面的改變,而影響腦缺血損傷的機(jī)制較復(fù)雜,包括興奮性損害、Ca2+超載、自由基及脂質(zhì)過(guò)氧化、線粒體功能障礙、NO、細(xì)胞凋亡,細(xì)胞因子等,這些因素之間可能還存在相互作用。因此探索腦缺血的病理生理過(guò)程,研究抗腦缺血損傷的藥物越來(lái)越受到重視。
2、隨著研究深入,發(fā)現(xiàn)硫化氫(hydrogensulfide,H2S)廣泛參與機(jī)體多種生理病理過(guò)程,被認(rèn)為是繼一氧化氮(nitricoxide,NO)和一氧化碳(carbonmonoxide,co)之后的第三種氣體信號(hào)分子,尤其是內(nèi)源性H2S作為一種新型神經(jīng)活性物質(zhì),對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能有著重要的調(diào)節(jié)作用。內(nèi)源性H2S在哺乳動(dòng)物體內(nèi)的產(chǎn)生主要有3條途徑,即胱硫醚.p.合酶(cystathionine.13.synthase,CBS)和胱硫醚千裂解酶(cystathio.nine-1,.1yase,CSE)途徑,主要以半胱氨酸為底物通過(guò)轉(zhuǎn)硫作
3、用生成H2S,近年發(fā)現(xiàn)第三種途徑,即3一巰基丙酮酸硫轉(zhuǎn)移酶(3.merca-ptopyruvatsulfurtransferase,3MST)途徑,3MST與半胱氨酸轉(zhuǎn)氨酶(cysteineaminotransferase,CAT)共同作用,以L.半胱氨酸和a.酮戊二酸為底物,生成H2S。研究發(fā)現(xiàn)H2S參與腦缺血性損傷的發(fā)生,且在腦缺血性損傷時(shí)呈現(xiàn)動(dòng)態(tài)變化過(guò)程;有學(xué)者發(fā)現(xiàn)H2S可通過(guò)對(duì)抗線粒體氧化應(yīng)激作用,保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞避免氧化損傷,因此我們建立大鼠局灶性大腦中動(dòng)脈栓塞(middlecerebralarteryocclusion,MCA
4、O)模型,觀察大鼠在局灶性腦缺血過(guò)程中不同時(shí)間內(nèi)源性H2S含量與3MST活性的變化,在此基礎(chǔ)上給予大鼠H2S的供體一硫氫化鈉(sodiumhydrosulfide,NariS),觀察其對(duì)缺血后腦組織線粒體損傷的影響。第一部分局灶性腦缺血大鼠腦組織硫化氫與3一巰基丙酮酸硫轉(zhuǎn)移酶的變化目的:觀察大鼠局灶性腦缺血過(guò)程中不同時(shí)間內(nèi)源性H2S含量與3MST的變化。方法:健康成年雄性SD大鼠共192只(96x2),體重250.3009,隨機(jī)中文摘要分為:①假手術(shù)組×2:僅做頸部手術(shù),不插入線栓。②缺血lh組×2;③缺血3h組×2;④缺血6h組×2
5、;⑤缺血9h組x2;⑥缺血12h組x2;⑦缺血24h組×2。假手術(shù)組共48只(不同時(shí)間點(diǎn)各8只),其余各組各8只。其中96只觀察計(jì)算梗死體積,另96只測(cè)定其他指標(biāo)。采用Zea-Longa等線栓法建立局灶性腦缺血模型,大鼠10%水合氯醛麻醉,消毒皮膚,取頸正中切口,分離組織,游離左側(cè)頸總動(dòng)脈(commoncarotidartery,CCA)、頸外動(dòng)脈(externalcarotidartery,ECA)、頸內(nèi)動(dòng)脈(internalcarotidartery,1ca),電凝頸外動(dòng)脈的分支及頸外動(dòng)脈與頸內(nèi)動(dòng)脈的交通支,結(jié)扎頸外動(dòng)脈遠(yuǎn)心端,電
6、灼斷,在結(jié)扎部位近心端剪一小口入栓塞線,栓線進(jìn)入頸內(nèi)動(dòng)脈,直至大腦中動(dòng)脈的起始處,長(zhǎng)度約18.5mm左右。假手術(shù)組只做頸部手術(shù),游離血管,但不插入線栓。參照Longa評(píng)分法,對(duì)大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能缺損程度的評(píng)分,以判定模型是否成功。分別于術(shù)后1h、3h、6h、9h、12h和24h后斷頭取腦,腦組織切片染色,觀察并計(jì)算腦梗死體積。檢測(cè)腦組織中H2S水平,參照Qu、Kimura等的研究方法并改良測(cè)3一巰基丙酮酸硫轉(zhuǎn)移酶的活性。結(jié)果:1假手術(shù)組神經(jīng)功能正常。與相應(yīng)的假手術(shù)組比較,缺血lh組無(wú)明顯神經(jīng)功能缺損癥狀,從缺血3h至U24h,出現(xiàn)不同程
7、度的神經(jīng)功能缺損癥狀。2假手術(shù)組大鼠腦組織無(wú)梗死。與相應(yīng)的假手術(shù)組比較,缺血1h時(shí)大鼠腦組織無(wú)明顯梗死,缺血3h時(shí)出現(xiàn)梗死灶,隨著時(shí)間的延長(zhǎng),缺血6h、9h、12h和24h時(shí)梗死灶逐漸增大愀0.01)。3假手術(shù)組大鼠在lh'--24h之間腦組織中H2S含量和3MST活性無(wú)明顯變化。與相應(yīng)的假手術(shù)組比較,缺血1h時(shí)H2S含量和3MST活性無(wú)明顯變化,隨時(shí)間的延長(zhǎng),缺血3h、6h、9h、12h和24h各組大鼠腦組織中H2S含量和3MST活性均明顯降低(P8、,H2S含量和3MST活性在缺血不同時(shí)間的動(dòng)態(tài)變化及腦組織梗死體積的改變,結(jié)果表明在缺血3h后j隨缺血時(shí)間延長(zhǎng),H2S含量和3MST活性明顯降低,腦組織梗死體積逐漸增大,提示H2S與3MST參與了局灶性腦缺血的發(fā)生發(fā)展。