增齡對大鼠局灶性腦缺血-再灌注損傷的影響

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1、增齡對大鼠局灶性腦缺血/再灌注損傷的影響作者：杜斌邱麗穎李英范紅斌程建青【摘要】目的觀察增齡對大鼠局灶性腦缺血/再灌注損傷(CI/RI)的影響。方法應(yīng)用線栓的方法，對10、16周齡的雄性SD大鼠作局部腦缺血2h、再灌24h模型,觀察增齡對大鼠神經(jīng)癥狀缺失評分、腦損傷面積、病理形態(tài)、腦組織乳酸(LD)、乳酸脫氫酶(LDH)及血清中LDH和肌酸激酶(CK)的影響。結(jié)果CI/RI24h,兩個年齡組神經(jīng)癥狀缺失評分及腦損傷面積明顯增大，病理形態(tài)改變嚴(yán)重、腦組織LD及LDH明顯下降，血清中LDH和CK明顯升高，以16周齡更為嚴(yán)重。結(jié)論CI

2、/RI隨年齡增長損傷程度增加，可能與腦的老齡化相關(guān)。【關(guān)鍵詞】增齡;腦缺血/再灌注損傷;大鼠腦缺血/再灌注損傷(CI/RI)導(dǎo)致的急性腦損傷，嚴(yán)重影響患者的預(yù)后和功能恢復(fù)。對于這個復(fù)雜多環(huán)節(jié)病理過程，其病情的發(fā)展和轉(zhuǎn)歸尚不明確。本文旨在通過研究不同年齡組大鼠局灶性CI/RI時腦損傷的改變，了解年齡對CI/RI的影響。　　1材料與方法　　1.1藥品和試劑氯化三苯基四氮唑(TTC)(上?；瘜W(xué)試劑公司),磷酸鹽緩沖液配制,避光低溫貯存;生化試劑盒(購自南京建成生物工程研究所);其余試劑均為國產(chǎn)分析純?！　?.2實驗動物與分組雄性SD大

3、鼠，由中國科學(xué)院上海實驗動物中心提供，動物編號為SCXK(滬)20070005。其中10周齡大鼠體重(190±20)g;16周齡大鼠體重(260±20)g。不同年齡組大鼠分別分為假手術(shù)組、CI/RI模型組。術(shù)前12h禁食,自由飲水。　　1.3模型制備用直徑0.205mm尼龍線作栓子,參照Longa等〔1〕腔內(nèi)線栓法制作右側(cè)大腦中動脈栓塞(MCAO)模型。局部腦缺血2h、拔出線栓行再灌24h?！　?.4神經(jīng)癥狀缺失評分按5分制評分標(biāo)準(zhǔn)，術(shù)后評1～3分者為手術(shù)成功標(biāo)志;0分：無明顯神經(jīng)病學(xué)癥狀;1分：不能完全伸展左前肢;2分：向左

4、側(cè)旋轉(zhuǎn);3分行走時向左側(cè)傾斜;4分：不能自行行走。　　1.5腦損傷范圍測定再灌24h時迅速斷頭取腦，4刀5分法沿冠狀切面切片，2%TTC染色后，正常組織呈紅色，損傷組織呈白色。CAD計算機(jī)軟件計算損傷面積，以占雙側(cè)大腦半球面積的百分比作為損傷面積〔2〕?！　?.6病理形態(tài)改變?nèi)∫暯徊嬷谅┒繁哪X冠狀切片，置10%福爾馬林中固定，常規(guī)脫水、透明、浸蠟、包埋等步驟，5μm腦組織冠狀切片作HE染色，觀察腦形態(tài)學(xué)變化?！　?.7腦組織LD、LDH的活性測定取腦組織與生理鹽水制成10%組織勻獎，3500r/min離心10min。取上清于-

5、20℃保存?zhèn)溆?。LD及LDH的測定嚴(yán)格按試劑盒說明進(jìn)行?！　?.8血清LDH、CK的活性測定再灌24h時迅速斷頭取血，分離血清樣本,LDH、CK的測定嚴(yán)格按試劑盒說明進(jìn)行。　　1.9統(tǒng)計學(xué)處理實驗數(shù)據(jù)以x±s表示,組間差異用t檢驗。　　2結(jié)果　　2.1各組大鼠神經(jīng)癥狀缺失評分與假手術(shù)組比較，10周齡CI/RI組與16周齡CI/RI組的大鼠均表現(xiàn)不同程度的神經(jīng)癥狀缺失(P<0.01)。與10周齡CI/RI組比較，16周齡CI/RI組神經(jīng)癥狀缺失明顯嚴(yán)重(P<0.01)，見表1。表1CI/RI時神經(jīng)癥狀缺失評分、腦損傷面

6、積的變化1)與同周齡假手術(shù)組比較，2)與10周齡CI/RI組比較：P<0.01，下表同　　2.2各組大鼠腦損傷范圍變化與10周齡CI/RI組比較，16周齡CI/RI組腦損傷面積擴(kuò)大(P<0.01)，(見表1，圖1)?！　?.3各組大鼠病理形態(tài)學(xué)的改變假手術(shù)組，皮層神經(jīng)細(xì)胞排列整齊，分布均勻，層次清楚，大小一致，胞膜完整，胞漿均勻，核膜清楚，染色質(zhì)顆粒細(xì)小均勻，有一小核仁。10周齡CI/RI組，大腦皮質(zhì)部分細(xì)胞消失，數(shù)目減少，排列紊亂，星形膠質(zhì)細(xì)胞增生，胞核深染，形態(tài)大小不一，血管周圍出現(xiàn)空暈，間質(zhì)疏松。16周齡CI/

7、RI組，大腦皮質(zhì)部分細(xì)胞消失，數(shù)目減少，排列紊亂，細(xì)胞體積大小不一，形態(tài)不規(guī)則，有呈三角形、菱形和不規(guī)則形，胞核深染，大小形態(tài)不一，核膜不清，核仁不明顯。中心區(qū)域出現(xiàn)壞死;星形膠質(zhì)細(xì)胞增生，膠質(zhì)結(jié)節(jié)形成，血管擴(kuò)張充血，其周圍出現(xiàn)空暈，間質(zhì)疏松，呈網(wǎng)狀改變等。見圖2。　　2.4各組大鼠腦組織LD、LDH含量變化與同周齡假手術(shù)組比較，10周齡CI/RI組LD、LDH水平顯著降低(P<0.01)，16周齡CI/RI組LD、LDH水平顯著低于10周齡CI/RI組(P<0.01)(表2)?！　?.5各組大鼠血清CK、LDH含量

8、的變化與同周齡假手術(shù)組比較，CI/RI組CK、LDH含量顯著升高(P<0.01)。16周齡CI/RI組血清中的CK、LDH含量明顯高于10周齡CI/RI組(P<0.01)(表3)。表2CIRI時大鼠腦組織中LD、LDH的變化表3CIRI時大鼠血清中C