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《實驗二 槐花米中蘆丁提取與檢識》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、實驗二槐花米中蘆丁的提取與檢識一、實驗目的1.通過蘆丁提取與精制，掌握堿溶酸沉法提取黃酮類化合物的原理和操作。2.掌握黃酮類化合物的主要性質(zhì)及黃酮甙的檢識方法。二、主要化學成分的結構及性質(zhì)蘆丁（Rutin）廣泛存在于植物界中，現(xiàn)發(fā)現(xiàn)蘆丁的植物至少在70種以上，如煙葉、槐花、蕎麥和蒲公英中均含有。尤其以槐花米（為豆科植物槐SophorajaponicaL.的干燥花蕾）和蕎麥中含量最高，可作為大量提取蘆丁的原料，蘆丁是由槲皮素（Querecetin）3位上的羥基與蕓香糖（Rutinose）脫水而成的甙類化合物。蘆丁為淡黃色粉末或針狀結晶，
2、含有三分子的結晶水，熔點為177-178℃。蘆丁略溶于熱水（1：200），難溶于冷水（1：8000），溶于熱甲醇（1∶7）、冷甲醇（1∶100）、熱乙醇（1∶30）、冷乙醇（1∶650），難溶于醋酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、石油醚等，易溶于吡啶及稀堿液中。蕓香苷R=－葡萄糖－鼠李糖槲皮素R=H三、實驗原理由槐花米中提取蘆丁的方法很多，目前我國多采用堿提酸沉的方法，其原理是：根據(jù)蘆丁分子中具有酚羥基，顯弱酸性，能與堿成鹽而增大溶解度，向此鹽溶液加入酸，調(diào)節(jié)pH值，則蘆丁又重新游離析出，從而獲得粗制蘆丁。除此方法外，還可以采用沸水
3、提取或醇提取法。四、實驗器材與試劑器材：鐵架臺，燒杯，電爐，烘箱、水浴鍋、三角燒瓶，布氏漏斗，濾紙，試管，層析槽，石棉網(wǎng)，毛細管等。試劑：蕓香苷標準品，生石灰，HCl，乙醇，甲醇，鎂粉，醋酸鎂，AlCl3，氯仿，鐵氰化鉀等。五、實驗內(nèi)容41、實驗操作流程圖濾液加水300ml，用石灰乳調(diào)節(jié)pH至8-9；加熱至微沸，維持pH至30min，趁熱抽濾槐花米粗粉20g蘆?。ň破罚╈o置，過濾，在60-70℃干燥濾液（棄去）沉淀（精制蘆丁）重結晶濾液殘渣（棄去）放置，冷卻60-70℃，用濃HCl調(diào)至pH4-5，靜置1小時，抽濾殘渣（棄去）2、具體
4、操作步驟（1）蘆丁的提取稱取槐花米20g，置于干燥的研磨中用缽棒擠壓成粗粉。稱取1-1.5g石灰粉（生石灰），置于干凈的小研缽中加入10ml水后研成乳液備用。將粉碎的槐花米置于500ml的燒杯中，加水300ml，在攪拌下加入石灰乳，調(diào)節(jié)pH至8-9，加熱微沸，維持pH值至30min，趁熱抽濾。棄去濾渣，冷卻至60-70℃，用濃HCl調(diào)至pH4-5，靜置1h，析出精制蘆丁，抽濾，棄去濾液，收集精制蘆丁。將精制蘆丁懸浮于蒸餾水中，加熱煮沸15min，然后趁熱過濾，棄去不溶物，充分靜置，過濾，收集蘆丁結晶，在60-70℃干燥，得到蘆丁精制品
5、。（2）蘆丁檢識取蘆丁3-4mg，加乙醇5-6ml使其溶解，分成四份做以下實驗：①鹽酸-鎂粉反應：取試樣溶液各2ml，分別置于兩支試管中，各加入鎂粉少許，再加入鹽酸數(shù)滴，觀察并記錄顏色變化。4②Molish反應：取試樣溶液各2ml，分置于兩支試管中，加10％α-萘酚乙醇溶液1ml，振搖后傾斜試管45°，沿管壁滴加1ml濃硫酸，靜置，觀察并記錄兩液面交界處顏色變化。③醋酸鎂反應：取兩張濾紙條，分別滴加試樣溶液后，加1％醋酸鎂甲醇溶液2滴，于紫外燈下觀察熒光變化，并記錄現(xiàn)象。④三氯化鋁反應：取兩張濾紙條，分別滴加試樣溶液后，加1％三氯化鋁
6、乙醇溶液2滴，于紫外燈下觀察熒光變化，并記錄現(xiàn)象。（3）薄層色譜檢識薄層板：硅膠G-CMC-Na試樣：自制1％蕓香苷乙醇溶液對照品：1％蕓香苷對照品乙醇溶液展開劑：氯仿-甲醇-甲酸（15∶5∶1）顯色劑：噴霧1％三氯化鐵和1％鐵氰化鉀水溶液，臨用時等體積混合六、實驗結果與分析附薄層層析操作具體步驟1、鋪板：先配置0.5%的羧甲基纖維素納溶液。以1：3的比例溶解薄層層析用的硅膠6g于研缽中，研磨勻漿無固體顆粒及氣泡，然后傾倒在玻璃板上，抖動玻璃板使之平整。然后在室溫下晾干，使用前在105-110℃烘焙0.5-1h即可。2、點樣：配制1％
7、蕓香苷乙醇溶液，用內(nèi)徑為0.5mm的平口毛細管吸取樣品溶液點樣。點樣前用鉛筆在距薄層板一端大約1cm出輕輕的畫一條水平橫線作為“起始線”。然后將樣品溶液小心點在“起始線”上。3、展開：把點好樣的薄層層析放進層析槽（氯仿：甲醇：甲酸=15∶5∶1）中展開。當展開劑前沿升至距薄層板上端大約1cm時，取出薄層板并標記出前沿的位置。4、顯色：噴霧1％三氯化鐵和1％鐵氰化鉀水溶液（臨用時等體積混合）在展開的薄層板上進行顯色。5、計算并比較蘆丁樣品與蕓香苷標準品的Rf值.Rf=a/b式中Rf—比移值a—原點到斑點中心的距離4b—原點到展開劑前沿的
8、距離4
